骨髓细胞学检查分析的原因.docx

关于骨髓细胞学检查分析的原因,关于骨髓细胞学检查分析的相关知识一） 增生程度估计 以涂片中有核细胞和成熟红细胞的大致比例估计骨髓增生程度，一般可分五级1） 增生极度活跃红细胞有核细胞为 1：1；增生极度活跃见于白血病、红白血病等2） 增生明显活跃红细胞有核细胞为 10：1；增生明显活跃见于白血病、增生性贫血等3） 增生活跃红细胞有核细胞为 20：1；增生活跃见于正常骨髓或某些贫血4） 增生低下红细胞有核细胞为 50：1；增生低下见于骨髓造血功能低下5） 增生极度低下红细胞有核细胞为 200：1；增生极度低下见于再生障碍性贫血二） 粒细胞系统和红细胞系统的比例关系 粒细胞系统与有核红细胞的比，简称粒、红比值它可以估计某一系统细胞数的增减正常粒、红比值为2~4：1粒、红比值正常 可见于正常骨髓象、原发性血小板减少性紫癜、粒系统和红细胞系统同时减少（如再生障碍性贫血）、多发性骨髓瘤等 粒、红比值增高 见于幼稚红细胞减少（如单纯红细胞性再生障碍性贫血）、急性化脓性细菌感染引起的粒细胞增多、类白血病样反应、粒细胞系统白血病等粒、红比值降低或比例倒置 见于粒细胞减少（如粒细胞缺乏症）、各种增生性贫血（如缺铁性贫血、失血后贫血、溶血性贫血等）、巨幼红细胞性贫血（如恶性贫血、营养性巨细胞性贫血、胃切除后巨幼红细胞性贫血等）。

三） 正常骨髓细胞参考值 正常骨髓细胞的参考值如下表所示骨髓细胞参考值细胞名称髓片（%）平均值土标准差原始血细胞0.080.01粒细胞系统原始粒细胞0.640.33早幼粒细胞1.570.60中性粒细胞中幼6.492.04晚幼7.901.97杆状核25.323.50分叶核9.442.92嗜酸粒细胞中幼0.380.23晚幼0.490.32杆状核1.250.61分叶核0.860.61嗜碱粒细胞中幼0.020.05晚幼0.060.07杆状核0.100.09分叶核0.300.05红细胞系统原始红细胞0.570.30早幼红细胞0.920.41中幼红细胞7.411.91晚幼红细胞10.752.36早巨红细胞中巨红细胞晚巨红细胞淋巴细胞单核原始淋巴细胞0.050.09幼稚淋巴细胞0.470.84淋巴细胞22.787.04单核细胞系统原始单核细胞0.010.01幼稚单核细胞0.140.19单核细胞3.00.88浆细胞系统原始浆细胞0.0040.02幼稚浆细胞0.1040.16浆细胞0.710.42其他细胞网状细胞0.160.21内皮细胞0.050.09巨核细胞0.030.06吞噬细胞0.050.09组织嗜碱细胞0.030.09组织嗜酸细胞0.0040.03脂肪细胞0.0030.02分类不明细胞0.0150.04粒细胞系统：有核红细胞2.760.87检验报告中应注意各系统比例及细胞异常情况的描述。

1) 粒细胞系统在全部骨髓细胞中所占比例，正常约占1/2 左右细胞大小应无异常，核浆发育平行，胞浆中无空泡、无毒性颗粒， 细胞浆内无Auer小体(Auer小体或称棒状小体，可能是异常发育的溶酶体，可见于粒细胞性白血病和单核细胞性白血病)，核应 无异常等2) 红细胞系统幼稚红细胞，正常约占有核细胞的1/5 左右正常时无巨幼红细胞发现，成熟红细胞大小、形态应无异常，胞浆无嗜 多染性、无嗜碱性点彩无细胞内异常内涵物，如Howell-Jolly小体、Cabot环等3) 淋巴细胞和单核细胞 所占百分比较少，前者约为0.2(20%)，小儿较高；后者约0.04(4%)以下，成熟阶段4) 浆细胞 以成熟为主，多发性骨髓瘤时浆细胞增加，并出现幼稚型和形态异常(如大小差别大、出现双核或多核等)5) 巨核细胞在一般情况下，骨髓片中可见巨核细胞，在1.5X3cm2的涂片内可见7~35个，多为产血小板型在原发性血小板减少性紫癜时，巨核细胞发育停滞，非产血小板型的早期巨核细胞占多数再生障碍性贫血时，巨核细胞减少或消失6) 非造血性细胞 一般数量较少，百分比很低如非造血性细胞增多见于再生障碍性贫血，尤其急性型骨髓报告单由以下三部分组成。

第一部分：骨髓涂片各个系统细胞计数的结果第二部分：骨髓涂片典型的镜下图像第三部分：文字报告部分，从骨髓的取材情况到各个系统细胞以及异常细胞的形态描述，最后根据各项内容并 结合临床表现及病史等得出结论第三部分是骨髓报告中最重要的部分，也是人们有可能看懂的部分它又由七个部分组成：(1) 骨髓取材、涂片和染色情况：主要与临床医生和检验医生的操作有关系2) 骨髓的增生程度、粒细胞系和红细胞系的比值(M/E):正常骨髓象增生活跃，粒/红比例为3〜4：13) 粒细胞系的增生程度、各个阶段粒细胞的比例和形态：正常骨髓报告显示粒细胞占有核细胞的50%〜60%, 各阶段粒细胞比例、形态大致正常4) 红细胞系的增生程度、各个阶段粒细胞的比例和形态：正常报告显示红细胞系占有核细胞的20%左右，各阶 段红细胞比例、形态大致正常，成熟红细胞未见异常5) 淋巴系和单核系：正常报告显示未见明显异常6) 巨细胞系：全片所见巨核细胞数目、血小板数量及形态特点正常时多描述为血小板不少7) 寄生虫和特殊细胞：正常应该见不到如上所述，一个正常的骨髓报告基本上应该是这样的如果您看到的骨髓报告有一部分的描述与上面的数据或 者图像描述相比有很大变化的话，可以说明那是一份异常的骨髓报告。

流式细胞术介绍流式细胞仪(Flow Cy tome ter简称FCM)是一项集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术以及细胞荧光 化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器概括来说，流式细胞术就是对于处在快速直线流动状态中的细胞 或生物颗粒进行多参数的、快速的定量分析和分选的技术随着各相关技术的迅速发展，FCM技术已经成为日益完善的 细胞分析和分选的工具.我科于2001年初引进美国B-D公司的双激光四色台式机，FACSCalibur,该机是目前最先进的临床型流式细胞仪，为临床诊断和科研提供了强有力的手段现将已开展的部分项目介绍如下1. 淋巴细胞亚群测定原理：淋巴细胞分为T淋巴细胞（CD3）、B淋巴细胞（CD19）、NK淋巴细胞（CD16+56）三大群；T淋巴细胞又分为T 辅助细胞/诱导细胞（CD4）、T抑制和细胞毒细胞（CD8）；以荧光标记的鼠抗人单克隆抗体来检测以上各群细胞 临床应用：总的T-淋巴细胞和B-淋巴细胞百分数可以用来判断某些免疫缺陷和自身免疫性疾病了解CD4+和CD8+淋巴细胞的百分数有助于监测患有免疫缺陷疾病、自身免疫性疾病或有免疫反应的病人的免疫状态患 有先天性或获得性免疫缺陷疾病例如SCID、AIDS的病人体内CD4+细胞亚群的百分率相对降低，而CD8+群体的百分率相 对升高。

在一些自身免疫性疾病和免疫反应例如急性GVHD和移植排斥中，T抑制/细胞毒性淋巴细胞所占的比例有可能在正常人 的范围之外在SLE病人中，CD8+淋巴细胞的相对百分比往往会降低，但当使用类固醇药物治疗时，也可能上升 CD4+/CD8+的比值可以用来评价那些自身免疫失调或被怀疑是免疫失调或已知患有免疫缺陷的病人的免疫状态,此外，这 一比值还可用来监测骨髓移植病人以免受到急性GVHD的攻击研究表明，自然杀伤（NK）淋巴细胞（CD3-CD16+和/或CD56+）能够介导对某些肿瘤细胞和病毒感染细胞的细胞毒性作 用2. HLA-B27 测定原理将单克隆抗体与外周血共孵育，裂解红细胞，洗涤固定后，上机检测在检测之前，仪器已经calibrationbeads和HLA-B27 calibration beads调试成功，并通过试剂批号的后缀确定了 decision marker的位置HLA-B27软件首先在FSC-FL2的点图上确定CD3强阳性细胞群体的位置，设定一个CD3+T淋巴细胞门，然后再根据FSC 设定光散射门，去除FSC过大或过小的细胞，确保门内至少有50%的CD3+T淋巴细胞，这样通过二者的结合，将随后进 行的分析严格地定位在T淋巴细胞上。

临床应用：HLA-B27基因属于I型MHC基因，基本上表达在机体中所有含核的细胞上，尤其是淋巴细胞的表面有丰富的 含量早在二十多年前，人们就已发现HLA-B27抗原的表达与强直性脊椎炎有着高度相关性，超过90%的强直性脊椎炎 患者其HLA-B27抗原表达为阳性，普通人群中仅5-10%的为阳性，而强直性脊椎炎由于其症状与许多疾病相似而难以确 诊，因此HLA-B27的检测在病情的诊断中有着重要意义在脊椎性关节病这一类的疾病中除了强直性脊椎炎以外，还有 许多其它的疾病与HLA-B27抗原的表达有着或多或少的相关性，比如说Reiter, s综和症，HLA-B27阳性率为70-90%； 银屑病性关节炎，HLA-B27阳性率为50-60%；葡萄膜炎（眼色素层炎），HLA-B27阳性率为40-50%；溃疡性结肠炎伴有 关节病，HLA-B27阳性率为5-10%等等，因此HLA-B27的检测在这些疾病的诊断中是一个非常有价值的指标3. DNA倍体分析原理ModFit LT是由美国Verity Software House公司设计，专门用于流式细胞术中进行细胞周期分析的软件它通过 对DNA含量直方图进行曲线拟合，能快速计算出各种倍体细胞的含量、细胞周期各时相及亚二倍体细胞所占的比例、DNA 指数、 G0/G1 期峰的变异系数等。

此外， 2.0版本还增加了“同步化分析”和“增殖分析”的功能，可分别进行同步化细 胞和增殖细胞的研究临床应用：细胞周期分析是细胞生物学、肿瘤学等学科重要的研究及检测指标，大量的文献已证实，DNA细胞周期的分 析对反映一个细胞群体的增殖活性具有重要意义，尤其对肿瘤细胞周期的分析，不仅有助于研究药物的作用机理，指导 用药，还可评价预后4. 血小板活化功能测定原理：早期血小板活化的标志物，即活化的gpIIb/IIIa复合物（PAC-1），其抗体与活化后血小板膜表面的gpIIb/IIIa 复合物纤维蛋白原结合位点相结合BDIS抗体为IgM型，建议使用PAC-1结合阻断剂RGDS做阴性对照血小板活化后 期的标志物（CD62P），特异地与活化血小板结合静止血小板胞浆内a颗粒含有CD62P，血小板活化时，颗粒内糖蛋白 向膜外释放，血小板表面表达CD62P临床应用：血小板活化试验，对于血小板功能，心血管疾病，脑梗塞的研究，糖尿病微血管病变有重要意义使用流式 细胞仪进行多参数分析，可以特异灵敏地检测血小板表面标记，了解血小板的活化状态和反应性，并同时获得更多关于 血小板的信息在疾病监测、抗血小板治疗病人的筛选及治疗监测、预测并发症等方面有良好的应用前景。

5．白血病免疫分型原理用CD45与侧向角（side seatter,SSC），对数取样后可将骨髓细胞清晰地分出淋巴细胞，单核细胞，成熟粒细胞， 幼稚细胞和红细胞群，其理论依据是CD45是所有白细胞的抗原其表达量在淋巴细胞最高，单核细胞，成熟粒细胞，早 期造血细胞（biasts）依次减弱。