04水质 总氮的测定 碱性过硫酸钾消解分光光度法.docx

水质总氮检测标准操作规程碱性过硫酸钾消解紫外分光光度法文件名称水质总氮检测标准操作规程…-碱性过硫酸钾消解紫外分光光度法文件编号SSYF-SOP-04起草人起草日期年月日审核人审核日期年月日批准人批准日期年月日一、目的规范水中总氮的碱性过硫酸钾消解紫外分光光度法标准操作规程二、适用范围1、适用于地表水、地下水、工业废水和生活污水中总氮的测定2、当样品量为10ml时，本方法的检出限为0.05mg/L，测定范围为0.20-7.00mg/L三、责任者实验室检验人员及负责人四、正文1、术语和定义总氮：指在规定的条件下，能测定的样品中溶解态氮及悬浮物中氮的总和，包括亚硝酸盐氮、硝酸盐氮、无机铵盐、溶解态氨及大部分有机含氮化合物中的氮2、方法原理在120〜124°C下，碱性过硫酸钾溶液使样品中含氮化合物的氮转化为硝酸盐，采用紫外分光光度法于波长220nm和275nm处，分别测定吸光度A220和A275,按公式（1）计算校正吸光度A,总氮（以N计）含量与校正吸光度A成正比A=A220-2A275⑴3、仪器分析天平、紫外分光光度计、高压蒸汽灭菌器、25ml具塞磨口玻璃比色管、10mm石英比色皿、实验室常用玻璃仪器等。

4、试剂4.1、浓盐酸：p=1.19g/ml4.2、浓硫酸：p=1.84g/ml4.3、盐酸溶液：（1+9）将100ml浓盐酸沿烧杯壁慢慢加入到900ml蒸馏水中，搅拌均匀，冷却备用4.4、硫酸溶液：（1+35）将10ml浓硫酸沿烧杯壁慢慢加入到350ml蒸馏水中，搅拌均匀，冷却备用4.5、氢氧化钠溶液：p=200g/L称取20.0g氢氧化钠溶于少量水中，稀释至100ml注：氢氧化钠含氮量应小于0.0005%4.6、氢氧化钠溶液：p=20g/L量取p=200g/L氢氧化钠溶液10.0ml，用水稀释至100ml4.7、碱性过硫酸钾溶液称取40.0g过硫酸钾溶于600ml水中（可置于50°C水浴中加热至全部溶解）；另称取15.0g氢氧化钠溶于300ml水中待氢氧化钠溶液冷却至室温后，混合两种溶液定容至1000ml,存放于聚乙烯瓶中，可保存一周注：氢氧化钠和过硫酸钾含氮量应小于0.0005%4.8、硝酸钾标准贮备液：p（N）=100mg/L取硝酸钾（基准试剂或优级纯）在105〜110C下烘干2h,在干燥器中冷却至室温称取0.7218g硝酸钾溶于适量（约100-200ml）水中，移至1000ml容量瓶中定容，混匀。

加入1-2ml三氯甲烷作为保护剂，在0-10C暗处保存，可稳定6个月4.9、硝酸钾标准使用液：p（N）=10.0mg/L量取10.00ml硝酸钾标准贮备液至100ml容量瓶中，用水稀释至标线,混匀，临用现配4.10、5%盐酸羟胺溶液称取5.0g盐酸羟胺溶于少量水中，加水稀释至100ml5、样品5.1、样品的采集和保存将采集好的样品贮存在聚乙烯瓶或硬质玻璃瓶中，用浓硫酸调节pH值至1〜2,常温下可保存7d贮存在聚乙烯瓶中，一20°C冷冻，可保存一个月5.2、干扰和消除当碘离子含量相对于总氮含量的2.2倍以上，溴离子含量相对于总氮含量的3.4倍以上时，对测定产生干扰水样中的六价铬离子和三价铁离子对测定产生干扰，可加入5%盐酸羟胺溶液1〜2ml消除5.3、试样的制备取适量样品用/=20g/L氢氧化钠溶液或（1+35）硫酸溶液调节pH值至5〜9，待测6、分析步骤6.1、校准曲线的绘制分别量取0.00、0.20、0.50、1.00、3.00、和7.00ml硝酸钾标准使用液于25ml具塞磨口玻璃比色管中，其对应的总氮含量分别为0.00、2.00、5.00、10.00、30.00和70.00Mg加水稀释至10.00ml,再加入5.00ml碱性过硫酸钾溶液，塞紧管塞，用纱布和线绳扎紧管塞，以防弹出。

将比色管置于高压蒸汽灭菌锅中，加热至顶压阀吹气，关阀，继续加热至120C开始计时，保持温度在120-124C之间30min自然冷却、开阀放气，移去外盖，取出比色管冷却至室温，按住管塞将比色管中的液体颠倒混匀2-3次若比色管在消解过程中出现管口或管塞破裂，应重新取样分析）每个比色管分别加入1.0ml（1+9）盐酸溶液，用水稀释至25ml标线，盖塞混匀使用10mm石英比色皿，在紫外分光光度计上，以水作参比，分别于波长220nm和275nm处测定吸光度零浓度的校正吸光度Ab、其他标准系列的校正吸光度As及其差值Ar按公式（2）、（3）和（4）进行计算以10ml样品中总氮（以N计）浓度为纵坐标，对应的A值为横坐标，绘制校准曲线rAb=Ab220-2Ab275(2)As=As220-2As275(3)Ar=As-Ab(4)式中：Ab——零浓度（空白）溶液的校正吸光度；Ab??——零浓度（空白）溶液于波长220nm处的吸光度；Ab275——零浓度（空白）溶液于波长275nm处的吸光度；Ab——标准溶液的校正吸光度；As220——标准溶液于波长220nm处的吸光度；s220As275——标准溶液于波长275nm处的吸光度；s275Ar——标准溶液的校正吸光度与零浓度（空白）溶液校正吸光度的差；6.2、试样的测定6.2.1、空白试验量取10.00ml蒸馏水于25ml具塞磨口玻璃比色管中，加入5.00ml碱性过硫酸钾溶液，按照前述步骤进行消解和吸光度的测定。

6.2.2试样测定量取10.00ml试样于25ml具塞磨口玻璃比色管中，加入5.00ml碱性过硫酸钾溶液，按照前述步骤进行消解和吸光度的测定若试样中含氮量超过70腿时，可减少取样量并加水稀释至10.00ml根据（6.1）中标准曲线方程计算出10ml样品中总氮的浓度若样品稀释后进行检测，计算结果需乘以稀释倍数6.3、结果表示当测定结果小于1.00mg/L时，保留到小数点后两位;大于等于1.00mg/L时，保留三位有效数字五、注意事项1、校准曲线的相关系数R应大于等于0.9992、每批样品应至少做一个空白试验，空白试验的校正吸光度Ab应小于0.030b超过该值时应检查实验用水、试剂（主要是氢氧化钠和过硫酸钾）纯度、器皿和高压蒸汽灭菌器的污染状况3、A275/A220X100%应小于20%，越小越好，若大于20%，应予以鉴别4、每批样品应至少测定10%的平行双样，样品数量少于10时，应至少测定一个平行双样当样品总氮含量W1.00mg/L时，测定结果相对偏差应W10%；当样品总氮含量＞1.00mg/L时，测定结果相对偏差应W5%测定结果以平行双样的平均值报出5、每批样品应测定一个校准曲线中间点浓度的标准溶液，其测定结果与校准曲线该点浓度的相对误差应＜10%。

否则，需重新绘制校准曲线6、实验所用的器皿和高压蒸汽灭菌器等均应无氮污染实验中所用的玻璃器皿应用（1+9）盐酸溶液或（1+35）硫酸溶液浸泡，用自来水冲洗后再用无氨水冲洗数次，洗净后立即使用高压蒸汽灭菌器应每周清洗7、在碱性过硫酸钾溶液配制过程中，温度过高会导致过硫酸钾分解失效，因此要控制水浴温度在60°C以下，而且应待氢氧化钠溶液温度冷却至室温后，再将其与过硫酸钾溶液混合、定容8、使用高压蒸汽灭菌器时，应定期检定压力表，并检查橡胶密封圈密封情况，避免因漏气而减压9、测定悬浮物较多的水样时，在过硫酸钾氧化后可能出现沉淀，遇此情况，可吸取氧化后的上清液进行检测。