色谱峰拖尾的原因(活动za)
2页1、色谱峰拖尾的原因 色谱峰拖尾的原因有很多,例如: 色谱柱本身填装问题,筛板堵塞或填料塌陷。柱坏。 柱头有污染。 样品超载。 样品溶剂不合适。 柱外效应。 化学或二次保留(硅羟基)效应。 缓冲容量不足或不合适。 重金属污染。 解决方法如下: 一、与化学有关的拖尾问题 流动相中,加入的三乙胺(用于碱性化合物)或醋酸胺(用于酸性化合物),未知化合物加醋酸三乙胺。 如仍然拖尾,将三乙胺换为二甲基辛胺(或醋酸二甲基辛胺)。 .降低进样量至 。 二、与色谱柱有关的拖尾问题 .如柱头处有强保留的样品组分积聚,反相柱可用倍柱体积的的二氯甲烷与甲醇,加氢氧化铵混合液冲洗。正向柱可用甲 醇冲洗。 .使用保护柱。 三、与系统有关的峰拖尾和峰加宽 . 进样体积过大,(通常)。 .进样阀与色谱柱及检测器之间的管路体积过大(最佳连接管应,内径为 )。 .检测器流通池的体积过大。 多数色谱分析工作者在日常工作中想必都遇到过这样的问题:当用反相柱进行酸性或碱性化合物分析时,常 常出现峰形拖尾现象,严重降低分离质量和精度,尤其是使用自动数据系统时。在此,笔者就各种造成峰形 拖尾的原因作一次简浅的分析:柱物理损坏 色谱柱
2、有物理损坏是造成峰形拖尾的根源。唯一的解决方法就是更换新柱。柱内填料污染 流动相和样品中的杂质是色谱柱主要污染源。流动相所用的各种溶剂至少是分析纯,尽量使用色谱纯试 剂。流动相所用的水最好是超纯水或全玻璃器皿双蒸水。用前先用溶剂微孔过滤(器)过滤,除去可能存在 的微粒。流动相建议现用现配,对于含盐的溶液尤其注意长置会产生细菌或出现沉淀。此外还得保证储存流 动相的容器清洁。复杂样品可选用溶剂微孔过滤(器)或样品预处理柱对样品进行预处理,确保样品中不 含微粒杂质。若样品不便处理,要使用保护柱。柱内填料污染时,可将柱头螺丝卸下,用专用工具挖出柱 内前段被污染填料,再以相同的填料重新填入,修复。 或以能溶解污染物的流动相按色谱柱使用的相反方向, 冲洗色谱柱(约至倍柱体积,或视具体情况而定。另外,此时不能接检测器),将污染物冲出色谱柱,再按 色谱柱标明的使用方向使用。柱进口处有异物 当断定是柱进口处有异物时,可将柱头螺丝卸下,取出滤帽并将其置于硝酸溶液中,用超声波清洗约分钟, 再置于超纯水中,并用超声波清洗约分钟,重新装入色谱柱内即可。样品浓度过高致使柱超载 样品在柱上超载能引起峰展宽,拖尾(或
3、伸舌)。适当减小进样量或样品浓度(需要时,可提高检测器灵敏 度)直至峰形和保留进度不再改变,便可消除这种不良影响。减小进样量还能改善其分离度。正常情况下, 样品中每种化合物在柱中进样量保持在范围内,不会引起明显超载。样品溶剂不对 选择合适的样品溶剂,以排除不必要的干扰。最好选用流动相溶解样品。柱外效应 柱外效应(即进样阀、色谱柱及检测器间的管路过长、直径过粗、管路接头不匹配、有死体积)是影响色 谱柱柱效的主要因素之一。所以在可能的条件下,色谱柱的两端连接管路要尽可能短,连接管内径尽可能细 小,切口务必平整光滑,尽可能的减小死体积,以防止因样品扩散造成不能反映色谱柱真实柱效等情况发生。 缓冲不足或不合适 在缓冲不好或离子强度过低的分离中,也会出现保留进度重现性差和峰形拖尾。增加缓冲浓度(与样品大 小相匹配)能改善此情况。硅醇基团作用 仔细分析色谱柱内填料表面性质可知:反相色谱柱填料的表面大约被键合相覆盖了一半,其余的就是未被 键合的硅醇基团。所谓的保留是指样品分子与键合相相互作用的结果。但是,酸性或碱性化合物与硅胶表面 残存的硅醇基团或金属杂质之间相互作用而引起双重保留机理,因此,发生了峰形拖尾。为了减小峰形拖 尾,通常可在流动相加入三乙胺(抑制剂)。三乙胺能与硅醇基团发生强烈的相互作用,从而降低或阻断样 品分子与硅醇基团的作用,以保证保留机理正常进行,并大大缓解了峰形拖尾。使用长链的硅醇基抑制剂, 虽起效较慢,但持续力较三乙胺长。因为抑制剂分子中除了胺基与硅醇基团发生极性作用外,大分子中非极 性部分与固定相也会发生反相作用而产生保留现象。如果将抑制剂加至样品中,效果会显著。 柱内金属污染 柱内金属污染(,等)可引起某引些化合物峰形拖尾。金属可由填料本身带进,也可由腐蚀性流动相缓慢 溶解柱进口的金属滤片,随流动相沉积到柱填料中。例如柱填料被金属污染后,造成酸性碱性样品拖尾,可 用碱洗酸洗后再键合的填料,得到的峰是尖锐且对称的。总而言之,解决峰形拖尾难题涉及到大量化学知识 和应用经验,读者可以根据自己实际情况加以汇总报告,不断提高分析技术水平。
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