血清天门冬氨酸氨基转移酶测定
8页1、血清天门冬氨酸氨基转移酶测定1 检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目,确保检测结果的准确。2 实验原理 本试剂以国际临床化学联合会(IFCC)推荐方法为基础,所采用的反应原理与反应式如下。 样本中的天门冬氨酸氨基转移酶催化L-天冬氨酸和-氧代戊二酸氨基转移,生成草酰乙酸和L谷氨酸; 在还原型辅酶I(NADH+H+)和苹果酸脱氢酶(MDH)的存在下,草酰乙酸被还原为L-苹果酸,还原型辅酶I(NADH+H+)被氧化为辅酶I(NAD),从而使波长340 nm处的吸光度值下降。通过对波长340 nm处吸光度值的下降速率进行监测,即可测得样本中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性L-天门冬氨酸+a-酮戊二酸AST 草酰乙酸+L-谷氨酸草酰乙酸+ NADH +H+ MDH苹果酸脱氢酶 L-苹果酸+NAD+3 标本 3.1 病人准备:12小时禁食。3.2 类型:血清。3.3 标本存放:3天内的活性损失:28保存:8%;1525保存:10%;标本稳定性:-20保存至少可稳定3个月。3.4 标本运输:常温条件下保存运输。3.5 标本拒收标准:标本溶血、细菌污染的标本。4 实验材料4.1 试剂:上
2、海复星长征医学科学有限公司AST试剂盒(沪食药监械(准)字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014)4.1.1 试剂组成 试剂1(R1): 乳酸脱氢酶 1365 U/L NADH 0.26mmol/L L-天冬氨酸300mmol/L Tris缓冲液 88mmol/L试剂2(R2): 苹果酸脱氢酶 1635 U/L 氧代戊二酸 36mmol/L Tris缓冲液 88mmol/L EDTA 5.0mmol/L4.1.2 试剂准备:试剂为即用式。4.1.3 试剂稳定性与贮存:在28避光、密封的储存条件下,试剂盒自生产之日起有效期为12个月。4.1.4 变质指示:当试剂有看得见的微生物生长,有浊度,或者未开盖的液体有沉淀时,表明试剂已变质,不能继续使用。4.1.5 注意事项:试剂中含有稳定剂,可能存在一定的刺激作用和毒性,请勿直接接触皮肤及眼睛。一旦接触,即用大量清水冲洗。请勿吞服。4.2 校准品:使用上海复星长征医学科学有限公司提供的AST校准品对自动分析仪进行校准。4.3 质控品:使用正常值、病理值复合控制品。5 仪器 AU2700生化分析仪,罗氏P800生化分析仪
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