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虎纹蛙胚胎发育的观察
4页1、蛙的催青和人工授精一、目的要求通过本实验,掌握中国虎纹蛙的催青及人工授精的操作技术,了解蛙从受精卵到变态阶 段的外形变化,进一步树立蛙胚发育中动态和立体的概念。二、仪器药品注射器、培养皿、解剖剪、解剖镊子、解剖镜、显微镜、塑料桶、1000ml的广口瓶、 吸管、放大镜、采集网。LRH-A3 (促黄体)、HCG (商品名:多情素)。三、材料虎纹蛙( Rana tigrina rugul)osa四、方法催青及人工授精1催青把刚从野外捕捉到的蛙,选择雌蛙体长大于 75mm 和雄蛙体长大于 70mm 的性成熟的 个体,放于水缸中。首先提高水温达到1820C。取雌蛙,在腹腔注射LRH-A (注射量每 只35卩g左右),hCG(注射量每只2030国际单位/ml),雄蛙的注射量可酌减一半。具体配置方法:LRH-A(100Mg每支)3支加水配成40ml溶液,雌蛙剂量为0.5ml, 雄蛙减半;HCG (每支10000国际单位)1支加水配成500ml溶液,雌蛙剂量1ml,雄蛙减 半。将注射后的虎纹蛙分成3桶,A桶10只雄蛙,B桶10只雌蛙,C桶5对雌雄。桶里放 少量水,将纸皮箱剪开洞口后盖住桶口,以重物压上
2、,留出透气口的同时防止蛙逃窜。2人工授精 精子悬浮液的制备:先用剪刀将雄蛙腹中线剖开,露出黄色或褐色的精巢,用剪刀剪下 精巢,放入培养皿或研钵中。用弯头剪刀将精巢剪碎或用研钵轻轻研磨,再加适量生理盐水, 用玻璃棒搅拌均匀,即可制得精子悬浮液。用左手握住催青后即将产卵的雌蛙,腹部向上,用右手拇指和食指由前向后轻轻挤压腹 部,卵即可由泄殖孔流出。把挤出的卵,收集在培养缸内,加入已制备好的精子悬浮液摇匀, 使精液和卵充分均匀接触, 1015min 后更换净水,洗去多余精子,经几次换水后,加入足 量清水,以保证受精卵正常发育。(三)胚胎发育的观察 取少许卵块,放在滤纸上轻轻滚动,以清除卵外之胶膜,再置于盛有清水的培养皿中, 用吸管将需要观察的受精卵,移入另一培养皿中,在解剖镜下,观察各发育时期的外部形态 的变化。下表为虎纹蛙正常胚胎发育时期表虎纹蛙(Ranatigrinarugulosa)正常发育时期表发育时间由受精 时所需 的时间(h)此时期耗 时(h)水温(C)该时期特点备注第一时期受精卵0.63h26.0 C动物极朝上,棕黑色;植物极 朝下,乳白色室温为26.0C第二时期2细胞期0.63
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