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甘露醇卵黄多粘菌素琼脂基础

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1、甘露醇卵黄多粘菌素琼脂基础甘露醇卵黄多粘菌素琼脂基础（MYP ）（MannitolYolkPolymyxinAgarBase）用途：用于蜡样芽抱杆菌的菌数测定及分离培养（GB/T4789.28-2003 中 4.64，GB/T4789.14-2003，SN0176-92 和 SN/T2206.2-2009， ISO标准）。原理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素和生长因子；D甘露醇为可发酵糖类；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂；酚红为pH指示剂；卵黄含有卵磷脂，蜡样芽抱杆菌产生卵磷脂酶，在菌落周围产生沉淀环；并发酵D甘露醇产酸使菌落显黄色；多粘菌素B可抑制杂菌的生长。配方（每升）:蛋白胨10g牛肉膏粉 1gD甘露醇10g氯化钠10g琼脂15g酚红0.025g最终 pH7.40.2使用方法：（平板计数法）1、称取本品46g，加入蒸馏水或去离子水1L搅拌加热煮沸至完全溶解分装三角瓶每瓶100mL丄2TC灭菌15分钟。2、用时加热溶化琼脂，冷至50C后，每100mL培养基基础中加入配套试剂1支（SR0170）（多粘菌素B10000IU）和50%卵黄液 5mL ,混匀后

2、倾注灭菌培养皿。3样品的制备。以无菌操作将检样25g（ mL）用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液做成10-110-5的稀释液。4、取各稀释液0.1mL接种到MYP琼脂平板上，用灭菌L形玻璃棒均匀涂布于整个琼脂表面。每稀释度接种两个MYP琼脂平板。5、将平板置于361C培养1220h。6、选取适当菌落的平板进行计数。并计算同一稀释度两个平板的平均菌落数。蜡样芽抱杆菌在MYP平板上生成的菌落为粉红色，环绕产生卵磷脂酶沉淀环。如反应不典型，可继续培养24h再计数。7、计数后从每个平板上选取5个已计数的菌落，按有关操作进行证实实验。8、根据证实实验确定为蜡样芽抱杆菌的菌落数，按比例计算出该皿内的蜡样芽抱杆菌菌落数，然后乘其稀释倍数，即得每克（或 mL ）样品所含蜡样芽抱杆菌数。例如MYP平板的可疑菌落为25个，取5个鉴定，证实为4个，乘上稀释倍数（如10-4 ）,再乘上1g （或 mL ）检样数（取的是 0.1mL 样）则为:25x4 / 5x10-4x10 二 2x106附：50%卵黄液:取鲜鸡蛋，用硬刷将蛋壳彻底洗净，沥干，放于70%酒精溶液中浸泡1h，以无菌操作取出卵黄，加入等

3、量灭菌生理盐水，混匀后备用。质量控制：质控菌株接种后于361C培养24h，结果如下。菌名菌号生长状况培养特征蜡样芽抱杆菌CMCC(B)63303良好菌落粉红色，周围有较大沉淀环枯草芽抱杆菌CMCC(B)63501良好黄色菌落，无沉淀环大肠埃希氏菌ATCC25922不生长贮存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。规格：250g参考文献：1. GB/T4789.14-2003中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验蜡样芽抱杆菌2. GB/T4789.28-2003中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验染色法,培养基和试剂3. SN0176-92中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品中蜡样芽抱杆菌检验方法4. SN/T2206.2-2009中华人民共和国出入境检验检疫行业标准化妆品微生物检验方法第2部分：需氧芽抱杆菌和蜡样芽抱杆菌5ISO79322004MicrobiologyoffoodandanimalfeedingstuffsHorizontalmethodfortheenumerationofpresumptiveBacilluscereusColony-counttechniqueat30C

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