家兔侧脑室注射组胺受体拮抗剂对神经源性肺水肿的影响
13页1、家兔侧脑室注射组胺受体拮抗剂对神经源性肺水肿的影响摘要目的: 探讨内源性组胺在家兔神经源性肺水肿发生中的作用。 方法: 在家兔侧脑室微量注射H 1 受体拮抗剂扑尔敏和H 2 受体拮抗剂西米替丁,采用形态、功能、生化指标相结合的方法,探讨中枢组胺与NPE发生之间的关系。测定指标包括下丘脑后区、延髓头端腹外侧区组胺含量、血浆一氧化氮含量、肺水比及水肿液蛋白.血浆蛋白值,光镜观察肺组织病理切片。 结果: NPE家兔PHA及RVLM组胺含量明显增高;注射扑尔敏后肺水比和值显着降低;注射扑尔敏后血浆NO含量明显降低。 结论: 肺毛细血管通透性的改变存在于NPE病理生理过程中;组胺通过中枢H 1 受体介导参与NPE的发病过程;血浆NO参与中枢组胺调控NPE的肺损伤过程。关键词 神经源性肺水肿;组胺;H 1 受体拮抗剂;H 2 受体拮抗剂;一氧化氮;家兔神经源性肺水肿是由中枢神经系统损伤引发外周交感系统极度兴奋而导致的一种暴发性肺水肿1 ,起病急,治疗困难,死亡率高。目前众多学者认为,CNS损伤后,交感神经系统兴奋引发一系列外周血流动力学改变,从而导致肺损伤是NPE发生的外周机制。但CNS损伤引起交
2、感神经系统兴奋的机制至今尚不清楚。中枢组胺能神经元在CNS有着广泛的纤维投射,具有多种生物学功能,近年来研究发现它与外周交感神经系统活性的调节密切相关。那么,中枢组胺有参与调控NPE发病过程的可能吗?本实验通过测定NPE动物脑区组胺含量以及经NPE动物的侧脑室微量注射组胺受体拮抗剂,观察组胺对外周NPE发病过程的影响,探讨中枢组胺与NPE发病的关系。1 对象与方法动物及分组健康新西兰大白兔48只,体重,雌雄不拘,由东南大学医学院动物中心提供,随机分为6组。空白对照组;生理盐水对照组:侧脑室注射%NS10l,以排除经侧脑室埋管及经管注射药物对实验动物的影响;NPE组:制作NPE模型;NPE加NS组:模型兔同时经侧脑室注射%NS10l,以排除经侧脑室埋管及经管注射药物对NPE动物的影响;NPE加扑尔敏组:模型兔同时经侧脑室注入H 1 受体拮抗剂CPA10l;NPE加西米替丁组:模型兔同时经侧脑室注入H 2 受体拮抗剂CTD10l。侧脑室定位、微量注射大白兔用25%乌拉坦4mlkg -1 耳缘静脉麻醉,气管插管后置于江湾型立体定位仪上,根据Sawyer图谱2 定位侧脑室。坐标为P 4 、H
3、+7 、LR 5 ,侧脑室插管外径为,内径为。按坐标置入插管后,拔出插管内芯见有清亮液体溢出即为侧脑室埋管成功,用自凝牙托粉及502胶固定。微量注射时拔出内芯,插入注射管,连接液体恒速推进器推注药液。右股静脉插管抽取血标本。上述手术完毕后将动物静置30min,待其生命体征恢复平稳后造模,并在造模同时经侧脑室分别注射CPA、CTD各100gL -1 ,5min注完,留针10min。侧脑室注射等体积NS作为对照。模型制备模型制备及成功标准参照文献3。在枕骨大孔处纵切一长为1cm的切口,用一头端略钝的7号头皮针头与动物长轴呈45在枕骨大孔处向头端斜穿刺进入小脑延髓池,进针长度为1014mm,回抽见有脑脊液,即匀速注入凝血酶35Ukg -1 及纤维蛋白原20mgkg -1 ,两药均由的%NS配制,注完留针10min。模型成功标准:小脑延髓池注入凝血酶及纤维蛋白原20min后,若气管导管内出现粉红色泡沫状液体,或开胸后不挤压肺而泡沫状液体自主地溢出气管导管,即为造模成功。荧光分光光度法测定脑区组胺含量实验结束后放血处死动物,迅速取全脑置于冰台上,分离出下丘脑后区和延髓头端腹外侧区,精确称重,荧光
4、法测定组胺含量4 。一氧化氮含量测定各组动物在造模后20min股静脉取血5ml。其中空白对照组和盐水对照组在各项手术操作结束静置30min后取血。血标本3000rmin -1 离心10min,取血浆-4冰箱保存。硝酸还原酶法测定血浆NO含量5 。肺水比计算实验结束,放血处死动物,开胸取肺称湿重然后将标本置于70烤箱中烤2d至恒重,称其干重。根据公式肺水比=.肺干重计算肺水比。水肿液蛋白.血浆蛋白值计算造模后20min从动物股静脉内抽取3ml静脉血置入肝素化的离心管内,然后放血处死动物,收集水肿液。将静脉血和水肿液分别以3000rmin -1 离心10min,取上清液-4冰箱保存。Lowery法6 测定蛋白质含量。根据公式=水肿液蛋白质含量.血浆蛋白质含量计算值。肺组织光镜观察实验结束后各组动物取肺组织做病理切片,HE染色,光镜下观察肺组织损伤情况。数据处理所有数据以xs表示,行t检验进行比较。2 结果NPE动物脑区组胺含量变化空白对照组和NPE组PHA组胺含量分别为和;空白对照组和NPE组RVLM组胺含量分别为和。NPE组PHA和RVLM组胺含量显着升高。侧脑室微量注射CPA及CTD肺
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