有机白萝卜表皮附生乳酸菌链霉素抗性分析论文

1、-毕业论文题目:有机白萝卜表皮附生乳酸菌链霉素抗性分析目录摘要1Abstract11 前言11.1 抗生素的定义11.2 抗生素的用途简介11.3 萝卜表皮附生乳酸菌11.4 链霉素11.5 16S rRNA分析技术在乳酸菌分类学的应用11.6 本论文研究的目的及意义12 材料和方法12.1 材料和仪器12.1.1 样品12.1.2 试剂12.1.3 仪器12.1.4 培养基及配制12.2 实验方法12.2.1 乳酸菌的培养12.2.2 乳酸菌的别离纯化12.2.3 乳酸菌总DNA的提取12.2.4 16S rRNA目的基因的PCR扩增及克隆分析12.2.5 最小抑制浓度MIC的测定13结果13.1 乳酸菌的别离13.2 基因组DNA的提取13.3 16S rRNA的PCR扩增片断电泳结果分析13.4 重组子的筛选和鉴定13.5 16S rRNA分析13.6 链霉素抗性分析结果14 结论1总结与体会1致词1参考文献1. z-摘要以市售的有机白萝卜为研究对象，分析其表皮附生的乳酸菌对链霉素的抗药性。别离菌株的16S rRNA和抗药性分析说明：从有机白萝卜表皮别离得到的43株菌分别属于Pe

2、diococcus pentosaceus44%、Leuconostoc mesenteroides16%、Leuconostoc pseudomesenteroides5%、Leuconostoc citreum16%、Leuconostoc holzapfelii14%和Weissella cibaria5%。在别离得到的43株乳酸菌中，共有8菌株表现出了对链霉素的抗药性，占所有乳酸菌的18.6%；其中，在19株P. pentosaceus中，有5株菌表现出对链霉素的抗药性；L. mesenteroides和L. pseudomesenteroides对链霉素都表现为敏感；L. citreum、L. holzapfelii和W. cibaria分别有一株菌表现出对链霉素的抗药性。【关键词】有机白萝卜；乳酸菌；链霉素；抗药性AbstractThe epibiotic lactic acid bacteria (LAB) on the surface of organic radish were investigated by MRS culture, 16S rRNA and ant

3、ibiotic resistance. 43 isolates in current study were assigned to Pediococcus pentosaceus (44%), Leuconostoc mesenteroides (16%), Leuconostoc pseudomesenteroides (5%), Leuconostoc citreum (16%), Leuconostoc holzapfelii (14%) and Weissella cibaria (5%). And 8 (18.6%) isolates displayed the resistance of streptomycin. Among the Pediococcus pentosaceus, there were 5 isolates resistances of streptomycin. For Leuconostoc mesenteroides and Leuconostoc pseudomesenteroides, all of them were sensitive to

4、 streptomycin. In the Leuconostoc citreum, only one isolate displayed the resistance of streptomycin; Regarding the Leuconostoc holzapfelii, 1 isolate was resistance; For the Weissella cibaria, 1 isolate was resistance.Keywords: Organic white radish; Lactobacillus; streptomycin; resistance1 前言白萝卜是根菜类的主要蔬菜，属十字花科、萝卜属的一年或二年生草本双子叶植物1。在我国白萝卜栽培历史悠久，是一种药食同源的群众化蔬菜，富含维生素C、芥子油、淀粉酶和粗纤维，具有促进消化，增强食欲，加快胃肠蠕动和止咳化痰的作用，可以治疗或辅助治疗多种疾病，为食疗佳品，被本草纲目称之为“蔬中最有利者，因此常被作为水果而鲜食1。乳酸菌是蔬菜外表常见的附生微生物，长期以来被普遍认为是平安2。然而，近年来越来越多抗生素抗药

5、性乳酸菌被发现具有一定可转移的抗药性，为乳酸菌的平安敲响了警钟。1.1 抗生素的定义抗生素antibiotics是由微生物包括细菌、真菌、放线菌属或高等动植物在生活过程中所产生的具有抗病原体或其它活性的一类次级代产物，能干扰其他生活细胞发育功能的化学物质。现临床常用的抗生素有转基因工程菌3培养液液中提取物以及用化学方法合成或半合成的化合物。目前天然抗生素不下万种。1.2 抗生素的用途简介抗生素以前被称为抗菌素，事实上它不仅能杀灭细菌而且对霉菌、支原体、衣原体、螺旋体、立克次氏体等其它致病微生物也有良好的抑制和杀灭作用，通常将抗菌素改称为抗生素。抗生素可以是*些微生物生长繁殖过程中产生的一种物质，用于治病的抗生素除由此直接提取外；还有完全用人工合成或局部人工合成的。通俗地讲，抗生素就是用于治疗各种非病毒感染的药物。但是在临床使用中已经显现了许多副作用。1.3 萝卜表皮附生乳酸菌乳酸菌lactic acid bacteria是一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称，它属于发酵糖类，其主要产物为乳酸。乳酸菌是一群细菌，它们数量相当庞大，种类异常复杂，到目前为止共发现有200多种，并分成了18个

6、属。其中相当大的一局部都是我们人体所必须并具有重要生理功能的菌，而且人体的肠道量存在着这些菌。并且国外生物学家都认为人类身体的安康程度和生命的长短都与肠道中的乳酸菌有着非常密切的关系。乳酸菌的发酵原理是：乳酸菌进展无氧呼吸，葡萄糖即经过糖酵解生成丙酮酸，丙酮酸再脱氢产生乳酸。乳酸菌可将酪蛋白被分解成肽和氨基酸，而且乳糖和柠檬酸可生成芳香性物质，从而产生风味。乳酸球菌和乳酸杆菌对蛋白质有较强的分解能力，是高酸生成菌。乳酸菌还有分解脂肪的能力，三丁酸甘油酯易被乳酸菌发酵剂分解。1.4 链霉素链霉素属于抗生素中氨基糖苷类。链霉素streptomycin是一种氨基葡萄糖型抗生素，分子式C21H39N7O12。 1943年美国S.A.瓦克斯曼从链霉菌中析离得到，是继青霉素后第二个生产并用于临床的抗生素。它的抗结核杆菌的特效作用，开创了结核病治疗的新纪元。链霉素是一种从灰链霉菌的培养液中提取的抗菌素。属于氨基糖甙碱性化合物，它与结核杆菌菌体核糖核酸蛋白体蛋白质结合，起到了干扰结核杆菌蛋白质合成的作用，从而杀灭或者抑制结核杆菌生长的作用。链霉素为白色无定形粉末，有吸湿性。易溶于水，不溶于大多数有机溶

7、剂，强酸、强碱条件下不稳定。硫酸链霉素制剂外观为黄色粉末，密度0.38g/L，pH1.53.5，易溶于水，呈微酸性，在中性和酸性条件下稳定，碱性条件下易失效。1.5 16S rRNA分析技术在乳酸菌分类学的应用16S ribosomal RNA是16S rRNA 的全名，它是原核生物的一种核糖体RNA，是原核核糖体30S小亚基的组成局部。由于其种类少，普遍性存在，分子大小适中，总量一般占细菌rRNA总量的80 %左右，在构造与功能上具有高度的保守性和特异性，基因序列一般包含约50个功能域，基因序列的变化缓慢，所以将16S rRNA 用作分子指标, 这样能实现微量、快速、准确、简便的对乳酸菌进展分类鉴定。16S rRNA中的S是沉降系数，反映生物大分子在离心场中向下沉降速度的一个指标。此沉降系数分为3种：5S、16 S和23 S，他们对应的编码基因rRNA的链长为3300、1540、120个核苷酸，细菌蛋白质的合成过程是由它们和核糖体大小亚基组合在一起共同完成的。16S rRNA基因是细菌上编码rRNA相对应的DNA序列，存在于所有细菌的基因组中。16S rRNA 基因片段一般有3 种分

8、析方法: 第一种是，将PCR 产物与16S rRNA 种属特异性的探针杂交，从而获取微生物组成信息。样品与探针也可以直接进展原位杂交检测，这样既能分析它们的空间分布，还能测定微生物的丰度和形态特征。此方法优点是简洁方便，通常大量应用于快速检测,。缺点是可能出现假阴性或假阳性结果。第二种是在质粒载体上将PCR 产物克隆，然后进展测序。通过将结果与16S rRNA 数据库中的序列进展比较的方法，找出它在进化树中的位置，这样就可以鉴定出萝卜外表乳酸菌中存在的乳酸菌种类,。此方法优点是获得的信息比较全,缺点是如果成分太复杂，工作量会很大。第三种是，对PCR 产物进展限制性片段长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphism s,RFLP)分析, 然后观察其酶切电泳图谱和数值分析来确定萝卜外表乳酸菌基因的核糖体型, 然后与核糖体库中的数据进展比较，这样可以分析不同种属之间的关系。随着分子分类的方法和理论的日渐成熟，16S rRNA分析技术成为了微生物分类学研究的一种可靠的工具。细菌主要是根据是细菌生理、生化性状和形态特征进展分类, 采用的对乳酸菌进展纯

9、培养别离方法，然后鉴定其生理、生化、形态、反响特征和免疫学特性4-5。1.6 本论文研究的目的及意义随着人们生活水平逐步提高，人们越来越重视食品平安问题。有机蔬菜纯天然、不含任何农药残留，通常被称为“零污染的蔬菜，因此备受消费者青睐。然而，近年来越来越多抗生素抗药性乳酸菌被发现具有一定可转移的抗药性，为乳酸菌的平安敲响了警钟。该研究以期待为有白机萝卜鲜食的食品平安评价提供参考。2 材料和方法2.1 材料和仪器2.1.1 样品有机白萝卜样品购置于有机蔬菜种植基地零售超市。2.1.2 试剂2.1.2.1 DNA提取与检测试剂表1 DNA提取与检测试剂试剂生产厂家ddH2O奥博星生物技术*公司TE Buffer奥博星生物技术*公司10%W/VSDS奥博星生物技术*公司20 mg/mL蛋白酶K奥博星生物技术*公司5M NaCl奥博星生物技术*公司CTAB/ NaCl溶液pH8.0市科龙化工试剂厂241氯仿/异戊醇市科龙化工试剂厂25241 苯酚/氯仿/异戊醇市科龙化工试剂厂异丙醇市科龙化工试剂厂无水乙醇、70%乙醇市科龙化工试剂厂电泳级琼脂糖市科龙化工试剂厂核酸染色剂市科龙化工试剂厂DNA Marker I, DNA Marker VII市科龙化工试剂厂2.1.2.2 PCR扩增试剂表2 PCR扩增试剂PCR扩增试剂生产厂家4种底物：dNTP (dATP+dCTP+dGTP+dTTP)Tiangen公司10Taq 缓冲液Tiangen公司Taq DNA polymerase ( 5.0U/l )Tiangen公司MgCl225

《有机白萝卜表皮附生乳酸菌链霉素抗性分析论文》由会员cn****1分享，可在线阅读，更多相关《有机白萝卜表皮附生乳酸菌链霉素抗性分析论文》请在金锄头文库上搜索。