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保健食品中核苷酸的测定

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卖家[上传人]：壹****1

文档编号：507896649

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1、保健食品中核苷酸的测定Determination of nucleotide in health food 1 范围本方法规定了以液相色谱法测定保健食品中的核苷酸。本方法适用于作为功效成分添加于婴幼儿配方奶粉中核苷酸的测定。本方法检出限：胞嘧啶核苷（CMP）0.04g/ mL、脲嘧啶核苷（UMP）0.05g/ mL、腺嘌呤核苷（AMP）0.05g/ mL、鸟嘌呤核苷（GMP）0.06g/ mL、次黄嘌呤核苷（IMP）0.04g/ mL。本方法线性范围：胞嘧啶核苷（CMP）0.99212.4g/ mL，脲嘧啶核苷（UMP）1.1714.6g/ mL、腺嘌呤核苷（AMP）1.0112.6g/ mL、鸟嘌呤核苷（GMP）0.94812.3g/ mL、次黄嘌呤核苷（IMP）1.3016.3g/ mL。2 原理将试样溶解、去除蛋白后, 使用氨基固相萃取柱对核苷酸进行净化富集，根据高效液相色谱紫外检测器在254nm处的响应进行定性定量。3 试剂除非另有说明, 在分析中仅使用确定为分析纯的试剂和双蒸水。3.1 甲醇优级纯。3.2 乙酸。3.3 磷酸二氢钾。 3.4 磷酸氢二钾。 3.5 季铵盐固

2、相萃取柱。3.6 核苷酸标准储备溶液：准确称量经100，4h干燥处理的标准品胞嘧啶核苷（CMP）100mg，脲嘧啶核苷（UMP）、腺嘌呤核苷（AMP）、鸟嘌呤核苷（GMP）、次黄嘌呤核苷（IMP）各40mg，加水定容至100mL。3.7 核苷酸标准使用液：将核苷酸标准储备溶液用0.25mol/L,pH=3的磷酸二氢钾稀释100倍。4 仪器设备4.1 高效液相色谱仪：附紫外检测器（UV）。5 分析步骤5.1 试样处理5.1.1 准确称取10g试样于100mL容量瓶中，加入约50热水80mL，彻底混匀。当试样液达到室温后用水定容至刻度。5.1.2 准确吸取10mL试样溶液至100mL容量瓶中，加入0.5乙酸5mL、水10mL，混匀后静置5min以沉淀蛋白。用水定容至刻度，混匀后过滤，弃去数mL初滤液后收集约30mL滤液。5.1.3 将季铵盐固相萃取柱先用10mL甲醇、10mL水活化后，再将20mL试样滤液过滤,以1mL水清洗萃取柱，用0.25mol/L,pH=3.5磷酸二氢钾溶液洗脱出5mL滤液。全部过程需要控制流速1滴/秒。5.2 液相色谱参考条件5.2.1 色谱柱: C18柱 3

3、.9150mm。 5.2.2 柱温：25。 5.2.3 紫外检测器：检测波长 254nm。 5.2.4 流动相：0.01mol/L磷酸二氢钾：0.1mol/L磷酸氢二钾480：20。5.2.5 流速：0.6mL/min。5.2.6 进样量：10mL。5.2.7色谱分析：量取10L标准溶液及试样溶液注入色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。5.2.8 保留时间在上述色谱条件下, 5种核苷酸的保留时间见色谱图, 浓度分别为胞嘧啶核苷（CMP）12.4g/mL，脲嘧啶核苷（UMP）14.6g/mL、腺嘌呤核苷（AMP）16.3g/mL、鸟嘌呤核苷（GMP）12.6g/mL、次黄嘌呤核苷（IMP）12.3g/mL。5.3 分别配制浓度为1.0、2.0、5.0、10.0、16.0g/mL的4种核苷酸标准溶液, 在给定的仪器条件下进行液相色谱分析, 以峰面积对浓度作标准曲线。1 分析结果表述6.1 计算式中：X 试样中核苷酸的含量，mg/100g； h1 试样峰高或峰面积； C 标准溶液浓度，mg/mL； K 稀释倍数； h2 标准溶液峰高或峰面积； m 试样量，g。6.2 结果表示：检测结果保留三位有效数字。6 技术参数回收率：回收率在85.096.7之间。使用相同方法对同一试样平行测定的绝对差值在10%范围内。

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