![](https://www.jinchutou.com/images/s.gif)
蓝白斑筛选原理及问题总结
2页1、资源共享 蓝白斑筛选原理及问题总结1问题:做转化时,用蓝白斑筛选,以获得阳性克隆。那它和直接利用AMP抗性,而不用蓝白斑筛选,有什么区别吗?蓝白斑筛选有什么作用吗?对于这一问题,我想,抗性筛选是防止杂菌生长。理论上说,当培养基中含有抗生素时,只有携带相应抗药性基因载体的细胞才能生存繁殖。蓝白筛选是验证是否有插入片断。两者结合起来,更有利于筛选到我们的目的菌。2问题:如果加了 AMP、IPTG和X-Gal,长出来的白斑一定都是含有插入片段的吗?有没有可能是载体自连的?答:可以说,世界上没有绝对的事情,即使加了 AMP、IPTG和X-Gal,长出来的白斑也不一定都是含有插入片段的阳性克隆,具体原因可能有:1)有可能是载体自连的假阳性;2)作时 AMP、 IPTG 和 X-Gal 其中一种或几种没涂均匀。3)有时即使插入片段也会出现篮斑。只要编码框没被破坏。3 问题:如何筛选重组菌落?答:可使用蓝/白斑筛选法,在涂布有IPTG和X-Gal的筛选平板上,重组菌株为白色,未转入重组质粒的菌株为蓝色。4 问题:蓝白斑筛选如何筛选合适的宿主菌株?答:如进行蓝/白斑筛选,宿主菌卜半乳糖苷酶的a-肽编码
2、区应在染色体或附加体上缺失掉(lacZAM15)。TOP10和DH5a都能用于蓝/白斑筛选。5问题:在蓝白斑筛选的过程中没有蓝斑是什么原因导致的?因为通过PCR检测插入片段的大小表明所挑的白斑克隆并没有插入片段。答:原因很多,1)可能是你用的培养基含有乳糖或葡萄糖,因为半乳糖甘酶会分解乳糖,导致不能与X-Gal反应,葡萄糖不会 诱导融合基因的表达。2)作时AMP、IPTG和X-Gal其中一种或几种没涂均匀。3)很多因素会造成PCR失败。6问题:我最近转化大肠杆菌时,通过蓝白斑筛选,挑出白色菌落做PCR,可是在电泳时发现在有目的带的同时还有比目的带小的杂带,不知为什么?我反复筛了几次,都是这样,可不可以摇菌提质粒?我应该下一步怎么做?答:针对这样的情况,我觉得,你首先做酶切鉴定,看看你的目的片段是否真正插入。其次,你应该检测CR过程有没有问题。7问题:我用Amp-IPTG-X-gal LB平板进行蓝白斑筛选重组子,为何筛出的全是白斑,没一个蓝斑,挑几个白斑摇菌扩增后PCR检测也全是阳性克隆,不会全都重组成功了吧?什么原因呢?答:这样的情况是完全有可能的,只要载体处理的好,应该说是有这种可
《蓝白斑筛选原理及问题总结》由会员cl****1分享,可在线阅读,更多相关《蓝白斑筛选原理及问题总结》请在金锄头文库上搜索。
![价值倾向测试64题.doc](https://union.152files.goldhoe.com/2023-8/10/aac6ff83-b5ca-4c73-a342-fb5c88ec8446/pic1.jpg)
价值倾向测试64题.doc
![护理健康教育的动态及尝试.docx](https://union.152files.goldhoe.com/2022-12/25/4ab39f3c-df0e-44a7-bd6e-2a73d3db475e/pic1.jpg)
护理健康教育的动态及尝试.docx
![开展作风建设年活动方案](https://union.152files.goldhoe.com/2022-7/16/7b8ecd39-714d-4dbf-91f2-420741ecde08/pic1.jpg)
开展作风建设年活动方案
![我在街上是汉字教案.doc](https://union.152files.goldhoe.com/2023-1/1/3f36b928-2307-4ea5-abcd-09f7bd0ace6a/pic1.jpg)
我在街上是汉字教案.doc
![税务主管年终个人工作总结合集.docx](https://union.152files.goldhoe.com/2023-12/2/2818e2c6-b8cd-43a1-8ce1-23a20715cce3/pic1.jpg)
税务主管年终个人工作总结合集.docx
![辅食添加的方法及应注意的问题——资深育儿顾问肖萤.doc](https://union.152files.goldhoe.com/2023-1/20/7859c82f-6f6e-4236-b3c0-ff08e13ae876/pic1.jpg)
辅食添加的方法及应注意的问题——资深育儿顾问肖萤.doc
![综合楼、车间建设项目可行性研究报告建议书申请备案](https://union.152files.goldhoe.com/2023-1/3/f1cbd83a-6e3f-42c7-9cc4-a6e66ed1c3e9/pic1.jpg)
综合楼、车间建设项目可行性研究报告建议书申请备案
![年产3万吨钢构项目可行性论证报告.doc](https://union.152files.goldhoe.com/2022-12/30/10545c35-b7eb-43fc-b547-f17da99bc2f7/pic1.jpg)
年产3万吨钢构项目可行性论证报告.doc
![什么叫做圆柱体和圆锥体.doc](https://union.152files.goldhoe.com/2023-6/24/c9007f39-2b27-4791-bbf6-7510c28b7d3b/pic1.jpg)
什么叫做圆柱体和圆锥体.doc
![厂房机械租赁合同(七篇)](https://union.152files.goldhoe.com/2022-11/16/e5c7a636-9fed-448e-b669-31c2d37fef5e/pic1.jpg)
厂房机械租赁合同(七篇)
![东营市事业编计算机基础.doc](https://union.152files.goldhoe.com/2024-1/8/681f8bfe-13f7-4b89-a8ad-602a20dd482e/pic1.jpg)
东营市事业编计算机基础.doc
![朝花夕拾复习题](https://union.152files.goldhoe.com/2023-3/30/a33c203d-aaa2-4eab-9492-731046eaf51b/pic1.jpg)
朝花夕拾复习题
![推荐:解聘劳动合同如何赔偿?.doc](https://union.152files.goldhoe.com/2023-1/11/dba21b4a-0243-4675-a49e-58b53a0ac41e/pic1.jpg)
推荐:解聘劳动合同如何赔偿?.doc
![乌拉特后旗促进文旅融合发展扶持奖励办法.docx](https://union.152files.goldhoe.com/2023-12/9/521e44a1-8864-4013-860e-243de5a9cc43/pic1.jpg)
乌拉特后旗促进文旅融合发展扶持奖励办法.docx
![技校女生体育学习动机与兴趣的研究及教学对策.docx](https://union.152files.goldhoe.com/2022-9/3/0eb9761f-c26e-44f1-8e1b-b1c667800e4e/pic1.jpg)
技校女生体育学习动机与兴趣的研究及教学对策.docx
![28、浅水洼里的小鱼.docx](https://union.152files.goldhoe.com/2024-1/18/f786f98f-3735-418b-8965-8057d72053f8/pic1.jpg)
28、浅水洼里的小鱼.docx
![渠道施工组织设计【建筑施工资料】.doc](https://union.152files.goldhoe.com/2023-8/30/825fc4d4-c25f-4160-8e1a-0c60e1dc1ad7/pic1.jpg)
渠道施工组织设计【建筑施工资料】.doc
![大班游戏活动教案.doc](https://union.152files.goldhoe.com/2022-10/1/dfc8ea36-5fce-47b6-b38d-cfbfb3675def/pic1.jpg)
大班游戏活动教案.doc
![大米代理销售协议.doc](https://union.152files.goldhoe.com/2023-3/31/3b7dd8c5-2ea8-4194-b7a7-58035f1b3da3/pic1.jpg)
大米代理销售协议.doc
![宁波燃料电池技术服务项目建议书](https://union.152files.goldhoe.com/2023-2/19/cff2eb30-d2d5-4684-85ca-0517224fb61d/pic1.jpg)
宁波燃料电池技术服务项目建议书
![沟通技巧资料全](/Images/s.gif)
2023-05-24 14页
![任务12设计及制作4位LED数码管显示电路](/Images/s.gif)
2023-05-18 3页
![铁路电力机车钳工一体化考试学习手册](/Images/s.gif)
2023-03-13 53页
![2017第33个教师节宣传标语范文](/Images/s.gif)
2022-12-13 4页
![污水处理维修保养协议](/Images/s.gif)
2023-11-21 16页
![北京交通拥堵问题分析及政策建议 本科毕业论文范文模板参考资料](/Images/s.gif)
2023-05-02 10页
![生活用品广告语](/Images/s.gif)
2023-06-22 4页
![落落笔对面显深情](/Images/s.gif)
2024-01-21 2页
![地震现场处置方案预案7篇](/Images/s.gif)
2023-06-02 24页
![视得安楼宇对讲维修手册](/Images/s.gif)
2023-07-30 5页