外周血PBMC的分离
2页外周血PBMC的分离原 理n 外周血各种血细胞的密度不尽相同,利用淋巴细胞分层液(Ficoll)作密度梯度离心,使一定比重的细胞群按相应密度梯度分布,从而将各种血细胞加以分离。 1.093外周血红细胞粒细胞单个核细胞血小板淋巴细胞单核细胞1.0301.0351.0751.090Ficoll:1.0770.001 (PBMC)1.0921500rpm, 20 , 30minPBMC红细胞粒细胞Ficoll稀释外周血Ficoll稀释的血浆、血小板实验步骤n 1.采血,稀释 (外周血:稀释液=1:2)n 2.在离心管中加入Ficoll,沿倾斜的管壁缓缓加入稀释的外周血(Ficoll:稀释血=1:2)n 3.18,1500r/min,离心30minn 4. 轻轻吸取PBMC层移入另一试管中n 5.加足量稀释液充分洗涤,1800 r/min离心5min ,弃上清。注意事项n 每毫升外周血液大约可获1106单个核细胞 n Ficoll应适量,外周血应充分稀释 n 温度直接影响到Ficoll的比重和分离效果 n 在Ficoll上加入稀释外周血时,应缓慢加,以免冲散界面 n 吸取单个核细胞层时,应避免吸出过多的上清液或分层液而导致血小板污染
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