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绿脓杆菌检测的方法及注意事项

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1、绿脓杆菌检测的方法及注意事项绿脓杆菌又被称为铜绿假单胞菌，是一种革兰氏阴性菌，形状呈长方形，喜好氧气，只进行单向的运动。绿脓杆菌是一种机会性感染细菌，对植物也具有机会性感染，因为被感染后渗出液呈绿色，因此而命名。绿脓杆菌在大自然中广泛分布，是临床上比较常见的条件致病菌之一。正常人的肠道、皮肤以及呼吸道中也存在绿脓杆菌。绿脓杆菌分解蛋白质的能力较强且能产生多种与毒力有关的物质，例如：胰肽酶、外毒素a、胶原酶等等。人体的任何部位及组织都可能发生绿脓杆菌感染。常见感染部位有呼吸道、角膜、尿道。绿脓杆菌会使人体免疫受损，虽然并不常见，但绿脓杆菌可能会造成肺炎，若隐形眼镜清洁不当也有机会引起眼角膜绿脓杆菌感染。那么这种细菌该如何检测呢：下面我们一起来了解绿脓杆菌的检测以及注意事项。一、绿脓杆菌检测方法由于绿脓杆菌为革兰氏阴性杆菌，它的实验特征为产生绿色色素和氧化酶，因此利用这一特征可以采取选择性培养基进行培养。然后进行生化实验和菌体检验，检测的主要设备和材料为显微镜及恒温培养箱，选择的培养基和试剂为NAC琼脂平皿、NAC液体培养基糖发酵培养基、尿素培养基、营养明胶、氧化酶试

2、剂等。检测程序如下：首先制作培养液，将样液放入培养基中，室温控制在37C静置24小时。将已经接种的NAC液体培养基放置在恒温37摄氏度的培养箱中培养24小时，然后观察其生长情况。将并未产生绿色色素的样本转种于NAC琼脂平皿?，同样在37度恒温的环境下培养 24小时。绿脓杆菌在NAC液体培养基中会呈现出均匀浑浊状态，并带有菌膜，大部分菌株能够在培养液上半部分形成绿色色素，在NAC琼脂平皿上会形成边缘不齐且扁平的锯齿状菌落，菌落的直径为23毫米。大部分菌落可以产生绿色色素，从而导致培养基呈现绿色，部分菌落需要延长培养时间才能产生绿色色素。氧化酶试验若呈现阳性那么可以报告检测出绿脓杆菌，42摄氏度生长试验、生化实验及半固体动力实验均呈阳性，则说明检测出绿脓杆菌。二、绿脓杆菌检测注意事项因为不同的培养基选择性存在差异，因此在检测绿脓杆菌时可以采用不同培养基进行分离培养，这样可以有效避免发生漏检情况，有利于提升检出率。绿脓杆菌检测需进行无菌操作，检测前要做好环境以及器具的灭菌工作。采样时需要均匀取样，这样才能保证所有的样品都具有代表性，在对样品进行检测前处理时，要严格遵守操作规

3、范，将样品溶液充分混匀，确保溶液的震荡次数。画线分离培养至关重要，这是检测绿脓杆菌的关键步骤，分离培养得到的单个菌落越多越有利于提升检出率。在进行革兰氏染色时，涂片要讲究薄厚均匀，还要保证菌体密度适宜，氧化酶试验是判定绿脓杆菌的重要依据，可以作为筛选试验，如果氧化酶试验结果为阴性，那么没必要进行后续的试验，可以直接判定为没有检出绿脓杆菌。浓度为1%的二甲基对苯二胺试液如果放置时间太久颜色会发生改变，应该配完立即使用。挑选菌落时应该使用玻璃棒，或者使用竹制小木棍代替，避免使用金属丝或者金属棒，目的是为了避免检出试验出现假阳性。因为实验室温度有所差异，当室温较低时，明胶培养基会呈现凝胶状，室温升高会逐渐变为液体状，这属于正常现象，不用担心会影响绿脓杆菌实验结果。在进行明胶液化实验时，在判定实验结果前必须将其放置在4-10摄氏度的冰箱中静置10-30 分钟，若明胶培养基呈现固态，则此实验结果为阴性，如果明胶培养基仍然为液态，则此实验结果为阳性。在进行绿脓菌素实验时，需要添加氯仿便于绿脓杆菌色素溶出，这时可以在无菌条件下将培养基捣碎。然后适当的延长浸泡时间，这种方法能够使阳性结果更加明显。三、小结绿脓杆菌在实验过程必须严格遵守无菌化操作，避免混入其他菌种影响检出结果，接种细菌时必须穿专用工作服，鞋帽也需要穿戴，接种样品、转种都必须在酒精灯前进行操作，吸管吸取菌液或者样品时，应该使用橡皮头进行吸取。若在无菌间安装空调，则必须有过滤装置。

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