分子生物学论文Word版
10页1、题 目:PCR技术姓 名:余 昊班 级:生物工程1201班学 号:20123785指导老师:刘继恺摘要:PCR是分子生物学的关键技术,又是常规技术。它的出现极大地推动了分子生物学的发展,旋即被迅速推广并应用到生命科学的各个领域。 关键词:PCR、发展简史、基本原理、基本操作、主要应用 整理为word格式 PCR技术一、概念: 聚合酶链式反应(polymerase chain reaction , PCR)是体外扩增DNA序列的技术。它与分子克隆和DNA序列分析方法几乎构成了整个分子生物学实验工作的基础。在这三种技术中,PCR方法理论上出现最早,实践中应用也最广泛。PCR技术使对微量的核酸(DNA或RNA)操作变得简单易行,同时还可以使核酸研究脱离活体生物。PCR技术的发明是分子生物学的一项革命,它极大地推动了分子生物学以及生物技术产业的发展。二、基本原理(一) PCR技术的基本原理: 该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下,依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板,借助一小段双链DNA来启动合成,通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板
2、中的一段互补序列结合,形成部分双链。在适宜的温度和环境下,DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3-OH末端,并以此为起始点,沿模板53方向延伸,合成一条新的DNA互补链。PCR反应的基本成分包括:模板DNA(待扩增DNA)、引物、4种脱氧核苷酸(dNTPs)、DNA聚合酶和适宜的缓冲液。类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成:模板DNA的高温变性:模板DNA经加热至93左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;模板DNA与引物的低温退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;引物的适温延伸:DNA模板-引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需24分钟,23小
3、时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。(二) PCR的反应动力学:整理为word格式 PCR的三个反应步骤反复进行,使DNA扩增量呈指数上升。反应最终的DNA扩增量可用Y(1X)n计算。Y代表DNA片段扩增后的拷贝数,X表示平(Y)均每次的扩增效率,n代表循环次数。平均扩增效率的理论值为100%,但在实际反应中平均效率达不到理论值。反应初期,靶序列DNA片段的增加呈指数形式,随着PCR产物的逐渐积累,被扩增的DNA片段不再呈指数增加,而进入线性增长期或静止期,即出现“停滞效应”,这种效应称平台期数、PCR扩增效率及DNA聚合酶PCR的种类和活性及非特异性产物的竟争等因素。大多数情况下,平台期的到来是不可避免的。(三) PCR扩增产物: 可分为长产物片段和短产物片段两部分。短产物片段的长度严格地限定在两个引物链5端之间,是需要扩增的特定片段。短产物片段和长产物片段是由于引物所结合的模板不一样而形成的,以一个原始模板为例,在第一个反应周期中,以两条互补的DNA为模板,引物是从3端开始延伸,其5端是固定的,3端则没有固定的止点,长短不一,这就是“长产物片段”。进入第二周期后,引物除与原始模板
4、结合外,还要同新合成的链(即“长产物片段”)结合。引物在与新链结合时,由于新链模板的5端序列是固定的,这就等于这次延伸的片段3端被固定了止点,保证了新片段的起点和止点都限定于引物扩增序列以内、形成长短一致的“短产物片段”。不难看出“短产物片段”是按指数倍数增加,而“长产物片段”则以算术倍数增加,几乎可以忽略不计,这使得PCR的反应产物不需要再纯化,就能保证足够纯DNA片段供分析与检测用。(四)标准的PCR反应体系: 10扩增缓冲液10ul 4种dNTP混合物各200umol/L 引物各10100pmol 模板DNA0.12ug TaqDNA聚合酶2.5u Mg2+1.5mmol/L 加双或三蒸水至100ulPCR反应五要素:参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+。整理为word格式引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。酶及其浓度:目前有两种TaqDNA聚合酶供应,一种是从栖热水生杆菌中提纯的天
《分子生物学论文Word版》由会员新**分享,可在线阅读,更多相关《分子生物学论文Word版》请在金锄头文库上搜索。
酒店销售工作计划
学校三年发展规划总结_1.docx
五星级酒店房务部前厅岗位说明书DOC.doc
高回填砖砌体专项施工方案三期小学幼儿园.doc
好用的学生学习的演讲稿四篇
八年级下学期数学教学计划范文汇编六篇.doc
演讲活动策划.doc
工程材料作业-学飞
争做四新邢台人演讲稿:在星辉斑斓里放歌精选WORD.docx
月子产妇可以吃洋葱吗_产妇生完孩子能吃洋葱吗.docx
工程交通疏导及方案
《法律为我们护航》教学设计【可编辑范本】.doc
高中生学期个人总结精选范文(3篇).doc
励志演讲稿-胜者不骄傲败者不气馁
2018护士长年终工作总结1.doc
中介购房合同范本(标准版)
2023年县劳动局实施妇女儿童发展规划中期监察评估工作报告范文.doc
大学生助学金申请书合集15篇
人教版七年级数学人教版第一章有理数测试题附答案
2021小学开展“规范管理”活动工作总结
2023-06-16 9页
2022-10-05 6页
2023-10-05 1页
2023-05-29 3页
2022-10-08 3页
2022-08-06 33页
2023-06-23 2页
2022-10-06 14页
2024-01-23 33页
2023-12-18 12页