液相色谱_质谱联用仪作业指导书

1、液相色谱-质谱联用仪1范围本作业指导书适用于新安装、使用中和修理后的离子阱和四极杆（包括三重四级） 两种类型LC-MS的校准，四极杆一飞行时间串联等其它类型台式LC-MS的校准可参照此 作业指导书进行。2引用文献下列文献所包含的条文，通过在本指导书中的引用而构成本指导书的条文。本指导 书发布时，所示版本均为有效。所有标准、规范或规程都会被修订，使用本指导书的各 方应探讨使用下列文献最新版本的可能性。JJF1001-1998通用计量术语及定义JJF1059-1999测量不确定度评定与表示JJF1164-2006台式气相色谱-质谱联用仪校准规范3概述液相色谱一质谱联用仪是以液相色谱为进样分离系统并通过一定的接口与质谱仪耦 合到仪器的分析仪器。样品经过色谱分离后经离子源离子化产生带有一定电荷、质量数 的离子，采用不同的质量分析器把电离子按质荷比（m/z）分开，得到依质量顺序排列的 质谱图。通过对质谱图的分析处理，进行定性、定量分析。液相色谱一质谱联用仪主要 由液相色谱、离子源、质量分析器、检测器、真空系统和计算机等几部分组成。4计量特性LC-MS各项技术指标见表1表1 LC-MS主要技术指标

2、技术指标要求质量范围不低于1000 u质量准确性*土 0.6 u分辨力（R） *W1 u信噪比*正ESI10 pg利血平，m/z609处S/NN10： 1 （峰峰值）负ESI20 pg氯霉素，m/z321处S/NN10： 1 （峰峰值）正 APCI20 pg利血平，m/z609处S/NN10： 1 （峰峰值）整机定量重复性*RSDW10%注：1标*的为必须校准项目2本技术指标仅供参考，不作为合格性判断依据5校准/测试条件5.1实验室环境要求5.1.1仪器室内不得有强烈的机械振动和电磁干扰，不得存放与实验无关的易燃、易爆 和强腐蚀性气体或试剂。5.1.2实验室温度：20C30C。5.1.3相对湿度：W70%。5.2标准物质与试剂5.2.1利血平-50%乙腈水溶液：100.0 pg/uL；5.2.2利血平-50%乙腈水溶液：10.0 pg/uL；5.2.3氯霉素-50%乙腈水溶液：200.0 pg/uL；5.2.4氯霉素-50%乙腈水溶液：20.0 pg/uL；5.2.5碘化铯钠-异丙醇水溶液：2 ug/u L碘化钠，50 ng/ u L碘化铯溶于50%异丙醇水溶液；5.3标准设备5.3.

3、1微量注射器：10 uL6校准/测试项目与校准/测试方法6.1外观检查6.1.1仪器应具有下列标识：名称、型号、制造厂名（或公司名）、出厂编号，并附使用说 明书。6.1.2仪器主机、色谱仪、计算机、真空部件和检测器等完好（符合出厂说明书要求），各 部件连接正确，各插件紧密配合，接触良好，仪器启动后无异常噪声。6.1.3仪器的按键开关、各调节旋纽均能正常工作，无松动现象，指示灯显示正常。6.1.4仪器运行中使用的高电压、大电流和高温等应在仪器的显著部位贴有警示标志，提 醒操作者注意这些潜在危险。6.1.5仪器应标明使用电压和频率等。6.2分辨力仪器稳定后，选择ESI正离子模式，采用手动调谐，将碘化铯钠溶液直接注入质谱 中，参照附录D均匀选择5个扫描质量，优化仪器至最佳状态，记录各目标离子峰得到 半峰宽w1/26.3质量范围参照6. 2条件将碘化铯钠溶液通过进样泵直接注入质谱中，选择Scan模式，设定扫 描范围为（202000）m/z，观察是否出现质量数1000以上的质谱峰。6.4质量准确度参照6.2条件，将碘化铯钠溶液通过进样泵直接注入质谱中，记录133, 323,473,623,922

4、,1072等碘化铯钠主要离子的质量数，理论值见附录D，根据公式（1） 计算质量准确度AM = M量 - M理论（1）式中就,测量第i个离子三次测量平均值，u；M；论一一第i个离子理论值，u。6.5信噪比6.5.1 正 ESI 源仪器稳定后，将100pg/ul的利血平溶液作为调谐液注入到质谱中，优化母离子609 至最佳响应后记录参数并保存调谐文件。调谐完毕后根据调谐文件设定参数，以50： 50乙腈水溶液为流动相，使用C18或等 效色谱柱分离，注入10pg利血平溶液，选择SIM模式，提取m/z = 609特征离子，根据 公式（2）计算信噪比。噪声(2)式中：Hm/z 提取离子的峰高;H噪声基线噪声。6.5.2 负 ESI 源仪器稳定后，将200pg/ul的氯霉素溶液作为调谐液注入到质谱中，优化母离子321 至最佳响应后记录参数并保存调谐文件。调谐完毕后根据调谐文件设定参数，以50： 50乙腈水溶液为流动相，使用C 18或等 效色谱柱分离，注入20pg氯霉素溶液，选择SIM模式，提取m/z = 321特征离子，根据 公式（2）计算信噪比。6.5.3 正 APCI 源仪器稳定后，将100pg/

5、ul的利血平溶液作为调谐液注入到质谱中，优化母离子609 至最佳响应后记录参数并保存调谐文件。调谐完毕后根据调谐文件设定参数，以50： 50乙腈水溶液为流动相，使用C 18或等 效色谱柱分离，注入20pg利血平溶液，选择SIM模式，提取m/z = 609特征离子，根据 公式（2）计算信噪比。6.6测量重复性参照6.5.1条件，注入200pg/ul的；利血平溶液10ul，选择SIM模式，提取m/z = 609 特征离子，连续测量6次，记录相应峰面积，根据公式（3）计算重复性:丈（尤-元）21RSD = V 4=x - x 100%6 -1 元式中：RSD相对标准偏差，%；七一一第i次测量峰面积； 亍峰面积的算术平均值。7校准/测试结果处理与复校周期7.1按程序文件CX 34-01证书/报告管理程序要求出具校准/测试报告。7.2检测部门对原始记录进行整理和归档。7.3根据校准结果，发校准证书或校准通知书。在校准结论中明确说明被校准仪器是否合 格、存在问题及建议。7.4液相色谱-质谱联用仪的校准周期为2年，更换重要部件、维修或对仪器性能怀疑时，应随时校准。附录A液相色谱-质谱联用仪信噪比扩展

6、不确定度A.1概述A.1.1测量依据SSY 0052-2010液相色谱-质谱联用仪作业指导书A.1.2环境条件温度(1527)C，相对湿度小于75%RH。A.1.3测量标准液相色谱-质谱联用仪标准物质。A.1.4被测对象Agilent6100A.1.5测量过程SSY 0052-2010液相色谱-质谱联用仪作业指导书A.1.6评定结果的使用符合上述条件的测量结果，一般可直接使用本不确定度的评定结果。A.2数学模型A.2.1数学模型：S / N Hz(1)噪声式中：H .:提取离子(m/z)的峰高H噪声:噪声峰高度A.3不确定度分量的计算A.3.1信号峰高值测量不确定度u(H /皿):仪器测量峰高时，它与标准物质的浓度、进样 量和峰高测量值的不确定度有关，因此信号峰高值测量不确定度应包括三个方面：信号 峰高测量值的相对不确定度进U H，标准物质的不确定度U(H)、微量进样器的不确定 度以H 3)和仪器重复测量的不确定度。A.3.1.1信号峰高测量值的相对不确定度进(H ):信号峰高测量值的测量有两种方法：1一是根据工作站中记录的选择离子流图，读取峰高值和基线值，以两点差的绝对值作为 峰高的

7、测量值，这种峰高的测量方法的相对不确定度优于0.2%；二是用工作站记录相应 的选择离子流图，再用游标卡尺量取谱图的峰高的高度。谱图的高度一般为100mm，峰高 为7090nm，其相对不确定度的分量估计为u(H) = 0.5%。A.3.1.2标准物质的相对不确定度u(H ):标准物质的相对不确定度是检定质谱计的不确 2定度的主要来源之一，它直接影响检定结果，标准物质的相对不确定度通常由标准物质 证书给出，标准物质证书给出其定值的误差为 10mg2%，认为其为矩形分布，所以 u(H2) = 2%/ 3 = 1.2%。A.3.1.3微量进样器校准的相对不确定度u(H3):微量注射器的体积刻度是重要的不确定 度来源之一，所以，微量注射器必须经校准后才能使用。规程中规定校准一般称量6次， 相对标准偏差1%。(进行检定结果计算时，应当采用校准值)u(W2) =16 = 0.4%oA.3.1.4重复测量相对不确定度u(H4):现在以一台6310的液相色谱-质谱联用仪为例做 重复性测量：在相同的条件重复进样10次，按仪器本身计算信噪比的软件进行计算，所 得的表1中的数据：表1：型号为6310的液相色谱

8、-质谱联用仪10次连续测量的数据序号12345678910信噪 比185132185225228219196174231212区3 为由上表可计算出其单次相对标准偏差s =品 一 =14.8%A.3.1.5 由于u(H)，u(H2)，u(H3)，u(H4)相对独立，则(H ) =、u(H)2 +u(H)2 +(H)2 +(H)2 =、0.5% +1.2% +0.4%+14.8%=14.9% z/m1234A.3.2基线噪声测量值的不确定度u(N):基线噪声测量的不确定度主要来自卡尺检定的 不确定度和用卡尺测量的不确定度，一般为2%。如果用色谱工作站记录基线噪声，则其 不确定度优于1%。A.4合成标准不确定度：A.4.1数学模型：S / N = HmH-噪声式中：H .:提取离子(m/z)的峰高H噪声:噪声峰高度A.4.2方差与传播系数由：2( j) = E Qf / Q x 2 u 2(x.)依据(1)可以推导出：u 2( S / N ) = C2 u 2 ( H ) + C2 u 2 (H 噪声)- -1c = Q(S /N)/QH=噪声- _ 1c2 =Q(S / N)/ QH噪声

9、=h噪声由于式中各不确定度分量彼此独立，=%= 1A.4.3表3不确定度一览表不确定度分量u (x.).标准不确定度来源标准不确定度分量 值 C x u(x.)u (H)z / mu (H )1信号峰高测量值的相对不确定 度0.5%u (H )2标准物质的不确定度1.2%u (H 3)微量进样器校准的相对不确定 度0.4%u (H 4)重复测量不确定度14.8%u( N)基线噪声值测量的不确定度2.0%A.4.4合成标准不确定度:由 u 2( S / N ) = c 2 u 2( H ) + c 2 u 2( H) , c = c = 1得：1z / m2噪声 12u (S / N) = u 2( H / ) + u 2( H 噪声).;(14.8%)2 + (2.0%)2 = 14.9%A.4.5扩展不确定度：为了计算的方便，均取k =2由公式U广kx u (S / N)可得：U = k x u (S / N) = 2 x 14.9% = 29.8% 牝 30%A.5扩展不确定度的评定为了计算的方便，均取k =2由公式 U 广 k x u (S / N)可得：U = k x u (S / N) = 2 x 14.9% = 29.

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