大豆皮中过氧化物酶的提取

1、华中农业大学楚天学院本科毕业论文（设计）目 录摘要1关键词2Abstract2Key words3前言31材料与方法41.1 试验材料41.1.1主要仪器及耗材41.1.2主要试剂41.1.3原材料51.2实验内容51.2.1过氧化物酶的提取工艺流程51.2.2 酶活测定51.2.3 放置时间对酶活影响61.2.4 单因素试验61.2.5 正交试验72结果与分析72.1酶活测定72.2放置时间对酶活影响92.3单因素试验92.3.1液料比对酶活的影响92.3.2提取时间对酶活的影响102.3.3提取液浓度对酶活的影响102.3.4提取温度对酶活的影响112.3.5提取次数对酶活的影响123讨论143.1关于酶活测定方法的思考143.2关于酶液稀释方法的思考143.3关于单因素试验及正交试验优化的思考143.4实验操作注意事项153.5本实验的存在的问题及改进15参考文献15致 谢16大豆皮中过氧化物酶的提取字数不足1万，还应扩展前言，实验方法部分要详尽，让没做过这个实验的也知道怎么做。结果与分析部分应尽可能结合文献，印证自己的观点。摘要过氧化物酶Peroxidase, POD，ECl.

2、11.1.7(x)是一类以血红素为辅基的酶，在生物中广泛存在，具有多种不同的生物功能，主要催化H2O2和有机过氧化物对多种有机物和无机物的氧化作用。它在蛋白质、多肽、激素、病毒、寄生虫、 生物降解及神经系统等方面都有应用，具有特异性强，灵敏度高等优点。描述性的话放在前言中，摘要只写论文中的核心内容，就算有描述的话也应尽量简洁。本课题以大豆皮为原料，对大豆皮中提取过氧化物酶的工艺进行研究。通过单因素试验考察不同液料比、提取时间、提取温度、提取次数、提取液体积等对酶活的影响，并选取单因素试验中影响最明显的3个因素进行正交试验。结果显示，液料比、提取时间、提取温度这三个因素对提取效果明显。然后对此三因素进行正交试验结果显示：液料比 20ml/g，提取时间 5h，提取温度 40下，提取效果很好。虽然正交验证试验不是最好的一组，但考虑到误差存在，可视为最适组合。关键词大豆皮，过氧化物酶，提取Extraction of peroxidase in soybean hullsAbstractPeroxidase POD，ECl.11.1.7(x)is a kind of redox enzyme w

3、ith hemoglobin as prostheric group，which widely exists in organism and has many different biological fimctionsIt mainly catalyzes the oxidation of hydrogen peroxide and organic peroxide with many inorganic and organic substancesFor the high specificity and sensitivity，it is widely applied in protein，polypepfide，hormone，virus，parasite, lignification，biology degradation andneuro-system etcThe soybean hulls as raw materials, to study the extraction process of peroxidase in soybean skinEffects of di

4、fferent ratio of liquid to material, extraction time, extraction temperature, extraction times, extraction volume effects on enzyme activity through the single factor experiment, and select the 3 most significant factors in the orthogonal test of single factor testThe results show, solid-liquid ratio, extraction time, extraction of these three factors on the extraction effect of temperature obviouslyThen the three factors of the orthogonal experiment results showed: liquid ratio 20ml/g, extracti

5、on time 5h, extraction temperature 40 , extraction, the effect is very goodAlthough the orthogonal results is not the best one group, but considering the error exists, can be regarded as the most suitable combinationKey wordsSoybean Hull , Peroxidase, Extraction前言前言部分还要扩展，内容要重新组织，与你的研究要结合起来，谈谈你的研究的意义。 过氧化物酶Peroxidase，POD，ECl，1117(x)是一类广泛存在于各种植 物、动物和微生物体内的氧化还原酶，催化过氧化氢和有机过氧化物对各种有机 物和无机物的氧化作用。其分子量范围为35000100000，其中含铁过氧化物酶是一类结构相似、功能相同的酶。迄今被研究最深入的应首推辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)。早在1940年，Thorell即

6、用电泳方法从部分春花的辣根组织中区分出2种不同的 HRP，之后此酶在植物正常和应激反应代谫中发挥重要作用而受到广泛关注，并对此酶进行了大量研究，涉及酶的种类、等电点、氨基酸组成和序列、生理功能，以及基因表达和调控的分子机制等，迄今此酶作为一种商品化试剂也广泛用于免疫组织化学、电镜技术、酶联反应和免疫印迹等生物学研究，并成为重要的渗断试剂。现在，科学家已然对大豆皮过氧化物酶开始重视了，也做过相应的性质研究。大豆皮是大豆制油工艺的副产品，占整个大豆体积的10，占整个大豆重量的8。大豆皮主要是大豆外层包被的物质，颜色为米黄色或浅黄色，由油脂加工热法脱皮或压碎筛理两种加工方法所得，主要成分是细胞壁和植物纤维，粗纤维含量为38，粗蛋白122，氧化钙053，磷018，木质素含量低于2(NRC 1996)。从大豆皮组成可知，大豆皮富含纤维素等非淀粉多糖，是一种天然膳食纤维源。据资料介绍，作为膳食纤维豆皮有其独特的生理活性，且其中所含的铁不但含量高，并以二价铁离子形式稳定存在不被氧化，因此大豆皮也是人类膳食铁的一个重要来源。基于此，国内外对大豆皮开发重点也在于饲料和膳食纤维的加工利用上。我国是大豆生产

7、国，年产量1500万吨以上，随着我国大豆榨油工业的发展和对豆粕需要量的增加，我国每年要进口大量的大豆，估计产生大豆皮240 万吨，随着全国大豆产量和加工能力不断提高，作为副产品的大豆皮产量是非常可观的。因此如何进行大豆皮综合利用和开发，以提高大豆加工的效益，生产出高附加值的产品正日益受到人们的重视。 大豆皮过氧化物酶(soybean hull peroxidase，SHP，ECl1117)是从大豆加工副产品豆皮或豆荚中提取的一类具有很高活性的酸性同工酶。自九十年代中期开始，人们对大豆皮过氧化物酶的研究逐渐重视起来。目前，国内对大豆皮过氧化物酶的研究还局限在提取分离方面，对酶的固定化和应用方面研究甚少。而国外的研究已经深入到酶的基因改造和分子修饰方面，对应用方面的研究也较多，主要在工业“三废”处理方面22。1材料与方法1.1 试验材料1.1.1主要仪器及耗材722S 分光光度计HH-S 6 数显恒温水浴锅FA2104B 电子天平仪器设备除了型号还应注明厂家150mL三角瓶，100ml量筒，1L量筒，50ml三角瓶，10mL移液管，试剂瓶，试管等。1.1.2主要试剂愈创木酚99%过氧化氢3

8、0%Na2HPO412H2ONaH2PO42H2O95%乙醇1.1.3原材料 黄豆（市售）1.2 实验内容1.2.1过氧化物酶的提取工艺流程磷酸缓冲液 具体步骤要详尽，让没做过的人也能照着做。5000 r/min 分光光度法 粉碎 过筛（60目）称量 浸取 离心 收集 测定酶活 1.2.2 酶活测定酶活力的测定方法：有两种主要方法即终止反应法和连续反应法。放入前言中加以说明，实验方法部分尽量不写评论性的语言。本实验以每min光密度（OD470nm ）变化0.01为1个过氧化物酶活力单位，是用连续反应法测定的。1.2.2.1测定原理：放入前言中过氧化物酶催化过氧化氢氧化酚类的反应，产物为醌类化合物，此化合物进一步缩合或与其他分子缩合，产生颜色较深的化合物。本实验以邻甲氧基苯酚（即愈创木酚）为过氧化物酶的底物，在此酶存在下，H2O2可将邻甲氧基苯酚氧化成红棕色的4-邻甲氧基苯酚，其反应为：愈创木酚 + 过氧化氢 4-邻甲氧基苯酚 + 水本实验用紫外吸收法测定产物4-邻甲氧基苯酚在470nm光吸收增加值表示产物增加量，划出光吸收-时间的速度曲线，求出曲线的斜率，即酶促反应初速度，再换算为酶活力。1.2.2.2试剂配制：4%愈创木酚（现配）：用移液枪取6ml愈创木酚原液加入到干净试剂瓶中，之后加入14.4ml 95%乙醇，用移液枪混合均匀备用。1%过氧化氢（现配）：用移液枪取5ml过氧化氢原液加入到干净试剂瓶中，之后加入14.5ml 水，用移液枪混合均匀备用。0.2mol/L Na2HPO4母液A的配制：称取Na2HPO412H2O 7.16g于150mL三角瓶中,先用小量蒸馏水溶解后定容至100ml。0.2molL1 NaH2PO4母液B的配制：称取NaH2PO42H2O3.12g于150mL三角瓶中,先用小量蒸馏水溶解后定容至100ml。系列pH值的磷酸缓冲液（PBS）的配制方法： A液x ml B液y ml建议放到附录中去表1-1 PBS配制表Table1-1 PBS preparation x y PH x y PH6.58.010.012.315.018.522.526.531.537.543.549.093.592.090.087.785.081.5

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