3胰岛素释放试验
6页1、实验三 胰岛素释放试验胰岛素是一分子量约为6000D的激素肽,由胰岛的0细胞分泌,经门静脉和 肝脏进入血循环。血清(浆)胰岛素水平受血糖浓度调控,血糖水平升高可刺激胰 岛细胞分泌胰岛素。糖尿病时,由于胰岛0 细胞分泌功能障碍和胰岛素生物学效 应不足(肝脏和外周组织对胰岛敏感性降低,对胰岛素的促进葡萄糖摄取作用抵 抗),从而产生高血糖症,亦可伴高胰岛素血症。检查胰岛素分泌功能对诊断 IDDM 有重要意义。在胰岛素依赖型糖尿病病人血清中常发现有胰岛素抗体,此抗体使胰岛素不 能发挥其生物活性,而且还会使胰岛分泌功能逐渐减退,甚至完全消失。因而胰 岛素浓度测定或 OGTT 不能得到准确的结果。胰岛素释放试验(insdn release test)是反映胰岛0细胞储备能力的试验,与 OGTT方法相同:即在空腹及服糖后30、60、120及180分钟采血分别测胰岛素和 C-肽,以直接了解胰岛0细胞功能。胰岛素测定方法有放射免疫法(RIA)和时间分辨荧光及化学发光免疫比浊法。【原理】采用双抗体夹心法,整个过程18 分钟完成。第1步:20?l标本、生物素化的抗胰岛素单克隆抗体和钉(Ru)标记的抗 胰岛素
2、单克隆抗体混匀,形成夹心复合物。第 2 步:加入链霉亲和素包被的微粒,让上述形成的复合物通过生物素与链 霉亲和素间的反应结合到微粒上。第 3 步:反应混和液吸到测量池中,微粒通过磁铁吸附到电极上,未结合的 物质被清洗液洗去,电极加电压后产生化学发光,通过光电倍增管进行测定。 检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2 点定标校正,由从 试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。【标本采集和准备】1. 必须选择以下的标本进行测定 血清:使用标准取样试管或含分离胶的试管采集。血浆:肝素锂、 EDTA-K3 或柠檬酸钠抗凝。2. 溶血有干扰,因为红细胞释放可降解胰岛素的肽酶。3. 标本在15 25C可稳定4小时,2 8C可稳定24小时,20C可稳定6个 月。只可冻融一次。4. 含沉淀的标本使用前需离心。5. 不要使用加热灭活的标本。6. 标本和质控品禁用叠氮钠防腐。7. 标本、定标液和质控品在测定前的温度应与室温平衡;放入仪器后应在2 小时内测定以避免蒸发的影响。【试剂】厂家提供原装试剂,可直接使用。1. 试剂: 胰岛素试剂盒, 100 人份测试。M:链霉亲和素包被的微粒,6.5m
3、l。链霉亲和素包被的微粒浓度0.72mg/ml,生物素结合能力470ng生物素/ml 粒子。含防腐剂。R1:生物素化的抗胰岛素单克隆抗体,10ml。生物素化的抗胰岛素单克隆抗体浓度 1.0mg/l,MES 缓冲液 0.05mol/l, PH6.0。含防腐剂。R2: Ru(bpy)32+标记的抗胰岛素单克隆抗体,10ml。Ru(bpy)32+ 标记的抗胰岛素单克隆抗体浓度 1. 75mg/l , MES 缓冲液 0.05mol/l, pH6.0。含防腐剂。2. 试剂的储藏和稳定性:存放在2-8C,切莫倒置,保证磁珠在测定前能完全地被仪器自动混匀。 未开封,可稳定至标明的保质期。开封后,2-8C12周; 放在仪器上, 4 周; 放在仪器上, 4周(室温2 - 25 C ;开盖时间累计不超过20小时)。【质控】1. 仪器配套质控品或其它合适的质控品。2. 各浓度区域的质控至少每24 小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期 应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内,如出现质控值落在 范围以外,应采取校正措施。请注意:商用质控品可能含动物来源的胰岛素。分析结果时,应考虑相应的交叉 反
4、应。【仪器】 全自动电化学发光、化学发光分析仪【仪器校准】1. 应用胰岛素定标液定标。2. 定标频率:每批试剂必须用新鲜试剂(试剂经仪器注册24 小时以内)标 定一次,如再次标定即根据下列要求:2.1 仪器:2.1.1 同一批号试剂一个月;2.1.2 同一试剂盒放置仪器上7天。3. 各种分析仪均适用的情况,根据要求进行标定:如质控结果超出范围时。 【操作步骤】1. 开机:在开机前,必须检查数据备份盘是否存在。开机后仪器自动启动, 此时触摸屏幕显示的状态是仪器上次关机时的状态。若无任何提示,请在屏幕上 随意触摸一下。2. 标本检测前的准备工作2.1 目测检查:各针是否良好,是否有粘附物;管道是否被夹和被折;标 品/试剂加载区、孵育池表面是否干净(吸样区和孵育池上的液体可能引起加样 头或反应杯被黏着,是造成抓手机械故障的隐患。2.2 检查各耗品、试剂、废液等2.3 检查蒸馏水:当蒸馏水用完时,键显红色,提示加水。必要时应对蒸 馏水桶进行清洗。2.4 清空废液桶:当废液桶已满,键显红色,提示清空。注意:清空后, 将废液桶外面的水滴擦去。2.5清空固体废物盘:当Tip和Cup达到1100个左右
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