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保健食品中水溶性粗多糖的测定方法

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卖家[上传人]：桔****

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1、保健食品中水溶性粗多糖的测定方法Determination of water-soluble crude polysaccharide in health food 1. 范围本方法规定了保健食品中以葡聚糖为主要结构分子量在10000以上的水溶性粗多糖的测定方法。本方法适用于保健食品中以葡聚糖为主要结构分子量在10000以上的水溶性粗多糖的测定。本方法最低检出浓度：5.0mg/L。本方法最佳线性范围：5.0ug/mL200ug/mL。2. 原理食品中分子量10000的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性的从其它高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的水溶性多糖，用苯酚-硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其颜色强度与水溶性粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以葡萄糖为标准参照物并以此计算食品中水溶性粗多糖含量。3试剂本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。3.1乙醇溶液(80%):20mL水中加入无水乙醇80mL,混匀。3.2氢氧化钠溶液(100g/L):称取100g氢氧化钠,加水溶解并稀释至1L,加入固体无水硫酸钠

2、至饱和,备用。3.3铜试剂储备液:称取3.0gCuSO4.5H2O,30.0g柠檬酸钠,加水溶解并稀释至1L, 混匀备用。3.4铜试剂溶液：取铜储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。临用新配。3.5洗涤剂：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液，10mL氢氧化钠溶液，混匀，临用新配。3.6硫酸溶液（10%）：取100mL浓硫酸加入到800mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。 3.7苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀。溶液置冰箱中可保存一月。3.8葡萄糖标准储备溶液:精密称在硫酸干燥器中干燥至恒重的葡萄糖标准0.5000g,加溶解,并定容至50mL,混匀,置冰箱中保存。此溶液每毫升含10.0mg葡萄糖。3.9葡萄糖标准使用液:吸取葡萄糖标准储备液1.00mL,置于100mL容量瓶中,加水至刻度,混匀,置冰箱中保存。此溶液每毫升含葡萄糖0.10mg。4仪器4.1分光光度计4.2离心机4.3旋转混匀器5. 分析步骤5.1标准曲线制备: 精密吸取葡萄糖标准使用液0.00,0.10,0.20,0.40,0.60,

3、0.80,1.00 mL(相当于葡萄糖,0.010,0.020,0.040,0.060,0.080,0.10mg)分别置于25mL比色管中,准确补充水至2.0mL,加入50g/L苯酚溶液1.0mL,在旋转混匀器上混匀,小心加入浓硫酸10.0mL,于旋转混匀器上小心混匀,置沸水浴中煮沸2min.,冷却后用分光光度计在485nm波长处以试剂空白溶液为参比,1cm比色皿测定吸光度值。以葡萄糖浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线。5.2试样处理5.2.1试样提取:称取混合均匀的固体试样2.0g,置于100mL容量瓶中,加水80mL左右,于水浴上加热2h,冷却至室温后补加水至刻度,混匀,过滤,弃去初滤液,收集余下滤液供沉淀多糖。5.2.2沉淀粗多糖:精密取5.2.1滤液5.0mL或液体试样5.0mL,置于50mL离心管中,加入无水乙醇20mL,混匀5min.,以3000rpm离心5min.,弃去上清液。残渣用80%乙醇溶液数毫升洗涤,离心后弃上清液,反复34次操作。残渣用水溶解并定容至5.0mL,混匀,供沉淀葡聚糖。5.2.3沉淀葡聚糖:精密取5.2.2溶液2mL置于20mL离心管中,加

4、入100g/L氢氧化钠溶液2.0mL，铜试剂溶液2.0mL,沸水浴中煮沸2min.,冷却后以3000rpm离心5min.,弃去上清液。残渣用洗涤液数毫升洗涤,离心，弃去上清液,反复3次操作,残渣用100mL/L硫酸溶液2.0 mL溶解并转移至50mL容量中,加水稀释至刻度,混匀。此溶液为试样测定液。5.3试样测定:精密吸取试样测定液2.0 mL置于25 mL比色管中,加入50g/L苯酚溶液1.0 mL,在旋转混匀器上混匀后,小心加入浓硫酸10.0mL后于旋转混匀器上小心混匀,置沸水浴中煮沸2min.,冷却至室温，用分光光度计在485nm波长处,以试剂空白为参比,1cm比色皿测定吸光度值。从标准曲线上查出葡萄糖含量,计算试样中水溶性粗多糖含量。同时作试样空白实验。54 分析结果表述试样中水溶性粗多糖的含量按式（5.4.1）计算。541计算式中: x试样中水溶性粗多糖含量(以葡萄糖计),mg/g; m1-试样测定液中葡萄糖的质量,mg; m2-试样空白液中葡萄糖质量,mg; m-试样质量,g; V1-试样提取液总体积,mL; V2-沉淀粗多糖所用试样提取液体积,mL; V3-粗多糖溶液体积,mL; V4-沉淀葡聚糖所用粗多糖溶液体积,mL; V5 -试样测定液总体积, mL; V6-测定用试样测定溶液体积,mL。 542 结果表示计算结果保留两位有效数字。6. 技术参数回收率：不同食品中不同浓度加标回收的回收率为87.8110.8%。精密度：同一试样10次测定结果的RSD为5.8%。干扰因素：测定过程中避免碳水化合物的玷污干扰。

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