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Rainbowbeads演示质控(QC)和软件操作练习(两根激光)

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文档编号：484466005

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常见问题

1、Rainbowbeads演示质控（QC）和Diva软件操作练习仪器质量控制（QC）可监测一定时间内仪器状态的稳定性。下面将介绍如何运行质控微球，调整光电倍增管（PMT）的电压，从而追踪一定时间内PMT电压的波动，以及如何确认激光延迟时间和面积因子。分析30-60次QC数据以判断其趋势。在做仪器QC的时候,尽可能保证多参数的稳定性。比如，尽量使用同一种微球，同样的批号，同样的鞘液压力和同样的样本流速。如果需要改变鞘液压力，那么您可以考虑在每一种压力条件下，单独建立一个Experiment（实验）”。1样本制备（1管）：实验材料：微米的Rainbow荧光微球（）；向1ml鞘液中加入2滴混合均匀的Rainbowbeads。上机检测前充分混匀微球。2、在浏览器（browser）”里建文件夹（QC）和实验组（Rainbowbeads），样本（日期），1个采集管，在实验组下并重命名（选中后，点右键Rename重命名）。3、将“浏览器”的采集箭头选中采集管，点击仪器框（instrument）”的参数（parameter）页面。除FSC、SSC散射光参数外，删除不必要的荧光参数，保留以下两个荧光参

2、数： FITC；检查488nm激光； APC；检查633nm激光。所有参数均选择线性，所有参数均选A面积信号，FSC和荧光参数还需选择H高度信号。4、在“通用工作页面（Globalsheet）”上建获取模板：一共画8个图：第一个为双参数散点图（DotPlot），后7个为单参数直方图（histogram）。选中工作页面工具栏中的绘图工具，在空白页面上单击，即出现相应图形，再调整大小。第一个图，横轴FSC-A，纵轴SSC-A，在横轴和纵轴均100,000左右位置，设单个微球的矩形门（rectanglegate）P（Parent）1；点击Ctrl,一起选中后七个图，单击右键，选择“ShowPopulation（细胞群体级别图）中的P1，即后七个图仅显示P1门内颗粒；右键单击任何一张图，选择ShowPopulationHierarchy（显示细胞群体级别）”，出现该图，以明确层层包含的细胞归属级别。当一个“门”设置完毕之后，可以手动改变其内细胞群体的颜色。双击“细胞群体级别图”上的颜色盒，从菜单中选择新颜色。第二个图,横轴FSC-A，在横轴100,000左右位置，做间隔门（interval

3、gate)P2；第三个图，横轴FSC-H，在横轴100,000左右位置，做间隔门P3;第四个图，横轴SSC-A，在横轴100,000附近，做间隔门P4;第五个图，横轴FITC-A，在横轴100,000附近，做间隔门P5;第六个图，横轴FITC-H，在横轴100,000附近，做间隔门P6;第七个图，横轴APC-A，在横轴100,000附近，做间隔门P7；第八个图，横轴APC-H，在横轴100,000附近，做间隔门P&选择这八个图，单击信息查看窗口内的“Title（标题）”页面，选中“Tube（采集管）和Population（细胞群体）复选框，在这八个图的标题位置均显示此两项。在细胞群体级别图上，对P1-P8进行重命名（选中，再点一下），例如singlebeads，FSC-A，SSC-A，FITC-A，FITC-H等。显示统计图：右键单击任何一张图，选择CreateStatisticsView（显示统计结果）”。右键单击统计图，选择EditStatisticsView（编辑统计结果）”。单击EditStatisticsView”窗口：“Header（表头）”页面，选择需要项目。Popula

4、tion（细胞群体）”页面，可以不选择“#Events（细胞数）”和“Parent（%母细胞群体，即门内细胞群体）”。因细胞群体级别图中已显示这几项。HBKhl|3hsa|c*|pBid*Ml削IE*怛口口口EMHOMala11“Statistics（统计）”页面，仅选择所有实验涉及到的参数的“Mean（平均值）”选项。:r住也讪rgwr6n:二真】rHo血rVrLrnntecarrrpnrrrn1厂rrpr（Trin1pro尸rFflrrnirrnrrjrrrrnr-fTrrrrrnlliranrrp厂rrnInstrumentStatusReport，打印或记录各激光和荧光的设置，存档，推荐每23周进行一次QC,使得面积因子和激光延迟时间处于正确设置状态。8、再次使用QC管：选择EditUserPreferences，取消Removetube-specificsettingsonduplicate选项，保证仪器条件与QC管一起复制。在“浏览框”中双击打开QC文件夹下的实验组，右键单击上一次的样本，然后选择“DuplicateWithoutData”（即不包含数据复制，仅保留仪器条件），一个新的质控采集管将出现在这一新的样本目录下，用当前的年月日对复制的QC样本命名，如上所述运行QC微球。因为本次QC开始运行的是上次QC的条件，所以PMT只需微调即可达到靶值。追踪30-60次QC数据，监测PMT的变化趋势。

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