实验6 高效液相色谱法的定量分析
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1、实验6高效液相色谱法的定量分析一. 实验目的1. 了解HPLC仪器基本结构，熟悉高效液相色谱仪的使用方法、2. 掌握液相色谱定性分析的方法；3. 加深对色谱分离原理的理解，掌握主要实验条件的选择二. 实验原理HPLC系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部件。有的仪器还有梯度洗脱装置、在线脱气机、自动 进样器、预柱或保护柱、柱温控制器等，现代HPLC还有电脑控制系统，进行自动化仪器 控制和数据处理。色谱定量分析的依据是被测组分的量与其峰面积成正比。但是峰面积的大小不仅 取决于组分的质量，而且还与它的性质有关。即当两个质量相同的不同组分在相同条件 下使用同一检测器进行测定时，所得的峰面积却不相同。保留时间（retention time，tR）从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。峰面积A：色谱峰与峰底之间的面积。峰面积一般用mm2、mmXmin或检测器的 输出的信号单位表示。色谱峰的面积可由色谱仪中的积分仪求得，也可通过以下方法求 得：对于对称的色谱峰：A=1.065h W1/2对于非对称色谱峰：A=1.065 h
2、（W0.15+W0.85）/2三. 实验设备高效液相色谱（HPLC）仪：waters e2695高液相色谱仪配2998二极管阵列（PDA） 检测器，自动进样器，色谱柱：Kromasil C-18 250*4.6mm四. 实验内容与主要步骤1. 样品：喹乙醇经0.45 m滤膜过滤至1 mL的样品管中。2. 色谱条件：流动相：甲醇：乙酸铵溶液（pH=4，0.02mol/L） =2： 8检测波长：270nm 流动相流速：1.0ml/min 进样量：10ul3. 开机，平衡：打开稳压电源，待电压稳定于220 V后，依次打开Varian 210泵，Varian 335 PDA检测 器电源开关，计算机主机；显示器。双击鼠标左键打开Varian WS；待屏幕上方出现LC Workstation后，单击鼠标System control连机进入程序。点击Method,编辑方法，点击System Setup最大压力、最小压力，后点击Save。将该方法保存在指定的文件夹中，放上配制好的 流动相，由File中打开Activate Method，选择编辑好的方法激活，平衡色谱柱，到基线基 本走平为止。4. 样品测定：最简单的单一面积比较法，以其标准溶液峰面积和样品液峰面积求出样品 液中被测物质的含量。五. 实验数据记录和处理：喹乙醇保留时间：喹乙醇峰面积：
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