食品中四种糖的含量测定

1、应用报告LC005饮料中四种糖的含量测定1 实验部分1.1 仪器与试剂LC1600高效液相色谱仪（含RI-201H示差折光检测器1台，P1600高压恒流泵 1台，上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；FA2004电子分析天平（上海舜宇恒平 科学仪器有限公司）；果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖标准品（97%，国药试剂）； 乙腈（色谱纯，美国Tedia）；二次蒸馏水。1.2 溶液配制1）糖标准贮备液分别称取1g （精确至0.1mg）的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖标准品，于50ml 容量瓶中，加水定容至刻度，得到浓度为 20mg/ml 的上述四种糖的混标标准贮 备液。2）糖标准溶液分别取标准贮备液 0.50ml、 1.00 ml、 2.00 ml、 3.00 ml、 5.00 ml 于 10ml 容量瓶中， 加水定容至刻度，分别得浓度为 1.0mg/ml、 2.0mg/ml、 4.0mg/ml、 6.0mg/ml、 10.0mg/ml 的混标标准溶液。3）乙酸锌溶液：称取 21.9g 乙酸锌，加 3ml 冰乙酸，加水溶解并稀释至 100ml。4）亚铁氰化钾溶液：称取 10.6g 铁氰化钾溶液，加水溶解并稀

2、释至 100ml。1.3 样品前处理含有二氧化碳的饮料，参考 GB/T 222212008 进样样品前处理。精密量取除了 CO2的样品5ml，移入10ml的容量瓶中，缓慢加入乙酸锌和亚铁 氰化钾溶液各0.5m 1，放置室温后，用水定容至刻度，摇匀，静置30min，用干 燥滤纸过滤，取 2ml 滤液，过 0.45um 微孔滤膜，作为待测样品溶液。1.4 色谱条件：色谱柱：Shodex NH2P-50 （4.6 X 250mm）流动相：乙腈/水=75/25上海菇宇恒甲科绯世器有唱鱼西 wharghai gUHWY Hgwqp讥空虽G1EMT1FIG 型员U処MNT ug.jijp流速：l.Oml/min柱温：30C进样量： 5ul2 实验结果2.1 精密度实验 将浓度为 4.0mg/ml 的混合标准溶液，在上述 HPLC 条件下连续进样 5 次，考察 分析方法在同一浓度水平分析的精密度，结果如下表所示。Rt/minARt/minRt/minRt/minARt/minAl7.39467l6.49.5865828.7l3.5057405.9l6.445590.627.3946873.89.58

3、65673.2l3.5227285.8l6.4235396.l37.40267l0.l59.5955776.5l3.5477499.7l6.448564047.3946958.49.59559l8.4l3.5l37467.2l6.4325630.757.3276675.059.475659.6l3.3887l69l6.42357l3.8RSD/%0.42l.8l0.57l.880.46l.450.062.l3表 1. 同一浓度混合标准溶液连续进样5 次的测定结果No. 果糖葡萄糖 蔗糖麦芽糖图 l 标准品 HPLC 谱图2.2 标准曲线 将一系列浓度的标准溶液由低浓度到高浓度进样，以峰面积 （纵坐标 Y 轴）对标 准品浓度（横坐标X轴，mg/ml）进行线性回归，求算标准曲线，结果如下：表 2 不同浓度混合标准溶液测定结果浓度/ mg/mlA/果糖A/葡萄糖A/蔗糖A/麦芽糖1.01715.21427.41983.71513.82.03489.622965.233714.172848.634.06734.055497.756783.85183.16.010215.138349.71076

4、3.17922.4510.017249.214148.817957.213278.7通过线性回归，以峰面积-浓度作图，分别得到四种糖的回归方程如下：果 糖：y=1721.8X-39. 9R=0.9999葡萄糖：y=1405.2X13. 9R=0.9998蔗 糖：y=1780.6X49. 4R=0.9994麦芽糖：y=1305.3X145.0R=0.99972.3加样回收率和重现性实验取已知含量的样品，加入浓度为10.0mg/ml的混合标准品溶液1 ml,按“样品前处理”操作，平行制备 3 份，得到样品溶液后按上述色谱条件进样分析，得到 加样回收率及重现性结果。表 3.加样回收率及重现性测定结果果糖样品中含量 /mg加入标准品实际量/mg测定含量 /mg加入标准品计算 /mg加样回收率 /%122.210.032.210.0100.0222.210.032.510.3103.0322.210.032.310.1101.0平均值101.3RSD%1.51葡萄糖样品中含量加入标准品实际量测定含量加入标准品计算加样回收率/mg/mg/mg/mg/%126.910.036.59.696.0226

5、.910.036.79.898.0326.910.036.59.696.0平均值96.7RSD%1.19蔗糖样品中含量加入标准品实际量测定含量加入标准品计算加样回收率/mg/mg/mg/mg/%1010.010.0010.00100.02010.09.859.8598.53010.010.3110.31103.1平均值100.5RSD%2.33上海菇宇恒平與綁悦器有限舍西SHANGHAI SUNNY HEMGPIhKS SCIENTIFIC INSTRUMENT CO.,LTD麦芽糖样品中含量加入标准品实际量测定含量加入标准品计算加样回收率/mg/mg/mg/mg/%1010.010.0910.09100.92010.010.1810.18101.83010.010.2810.28102.8平均值%101.8RSD%0.932.4 含量测定2.4.1 雪菲力样品中糖含量的测定 按“样品前处理”操作制备样品，按上述所建立的 HPLC 方法，对雪菲力样品 进行了分析。测定结果计算如下：表4.雪菲力样品中糖含量的测定结果A/果糖A/葡萄糖A/蔗糖A/麦芽糖峰面积7605.77580.3含量

6、mg/ml8.8810.770 0.20.40.60.8 1 1.21.41.61.8 2 2.22.42.62.8 3 3.23.43.S3.8 4 4.24.44.64.8 5 5.25.45.65.8 6 6.26.46.66.8 7 7.27.47.67.8 8 8.28.48.6&8 9 9.29.49.69.81010.-00.40.60.81111.2141 .W .813 2.S2.fl2.C2.&l 3 3.23.413.S3.81414.24.-114.64.81 SI 5.254S.CS.810 6.1646 6.81717.17fl7.ffi7.8l 8时间(jnin.)图 2 雪菲力样品的 HPLC 谱图2.4.2 可乐样品中糖含量的测定 按“样品前处理”操作制备样品，按上述所建立的 HPLC 方法，对可乐样品进 行了分析。测定结果计算如下：表5.可乐样品中糖含量的测定结果A/果糖A/葡萄糖A/蔗糖A/麦芽糖峰面积9599.66889.42689.7含量 mg/ml11.209.822.96SHANGHAIHENGPING 5匚正川只匚C：O“LTD |00.20.4.6081 121 4161J 2122.4262.B 332343战8 44244(.648 5 53.4565.8 6 6J6.46.66.8 7727.47.678 8828.4868.B 992969.81OIO.ffi.tt.1Dai11 l 41 fil &2222122 813313.13(3844 14 辑89515 4515 819616 6伍 8171717471788图 3 可乐样品的 HPLC 谱图3 结论使用 LC1600 泵配合 shodex 示差检测器，按 GB/T 222212008 方法操作，四种 糖在Shodex NH2P-50氨基柱上能得到良好的分离效果，精密度2.13%，回收 率在 96.7%101.8%之间。根据信噪比，按 3 倍噪声值计算，理论检出限为 0.2mg/m 1,符合 GB/T 222212008 的要求。

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