维康颗粒预防大鼠疲劳型亚健康的实验研究

1、维康颗粒预防大鼠疲劳型亚健康的实验研究作者：蔡茁,赵晓山，靳文，黄建华，刘艳艳，陈淑娟，孙晓敏，罗仁【摘要】 目的 探讨维康颗粒对大鼠疲劳型亚健康的预防作用。方法 应用负重强迫游泳部分睡眠剥夺复合因素建立疲劳型大鼠模型。将40只大鼠随机分为5组：正常对照，模型对照组，维康颗粒高、中、低剂量组。观察大鼠的行为学表现，记录大鼠首、末次力竭游泳时间，用乳酸试剂盒测定血浆乳酸含量，用自动生化分析仪检测血清尿素氮含量。结果 维康颗粒高、中、低剂量组均能不同程度地改善模型大鼠的行为学表现,提高大鼠力竭游泳时间（P0.05），显著降低大鼠力竭游泳后血浆乳酸（P0.05）和血清尿素氮水平（P0.05）。结论 维康颗粒可以预防疲劳型亚健康的发生。 【关键词】 中药;维康颗粒;预防;亚健康;大鼠Abstract:Objective To observe the effects of Weikanggranules on rat fatigue model of subhealth.Method TThe rat fatigue model of subhealth status was establish

2、ed by partial sleep deprivation in，combinaton with forced swimming load. 40 rats were divided into five groups: the control group, the model group, and three groups administered with Weikanggranules at high, mediate, and low doses respectively. The behavioral changes of rats were observed, and the first and last exhaustive swimming time of rats was recorded. At the end of the experiment, blood was drawn from post abdominal aorta, and blood lactic acid and urea nitrogen levels were determined.Res

3、ults The behaviors in the groups administered with Weikanggranules at high, mediate, and low doses were remarkably improved; compared with the model group, the last exhaustive swimming time of rats in the gropus administered with Weikanggranules increased significantly （P<0.05）, and blood lactic acid and urea nitrogen levels were remarkably reduced （P<0.05）.Conclusion Weikanggranules had good effects on prevention of fatiguesubhealth status in rats.Key words:Chinese medicine；Weikanggranule

4、s；prevention；subhealth；rats亚健康（subhealth）是指人体处于健康和疾病之间的一种状态。国内进行了较大规模的亚健康状态临床流行病学调研，结果表明亚健康状态的现患率较高（6070），其临床表现复杂，呈多样化、异质性，可分为疲劳型、胃肠型、疼痛型、心理型、社会型等多个亚型，其中疲劳型亚健康居于首位（占一半以上），严重危害了人们的身心健康和工作学习1-4。疲劳型亚健康是以疲劳为中心表现的症状群，包括疲劳、乏力、周身不适、精神不振、活力下降等，但是临床上不能确诊为疾病。本课题组根据中医药理论和多年的临床实践基础上研制出防治疲劳型亚健康状态的中药复方维康颗粒，前期的体外实验表明,维康颗粒可以保护疲劳型亚健康血清对骨骼肌细胞的损伤作用5。本研究拟进行中药维康颗粒干预疲劳型亚健康大鼠的在体研究，为其临床应用提供科学依据。1 材料与方法1.1 药品与试剂 维康颗粒由黄精、陈皮、党参等中药组成，南方医科大学南方医院提供（生产批号20051223），10 g/包。10%水合氯醛（武汉市和昌化工有限公司生产），其他化学试剂均为国产分析。乳酸测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所

5、。1.2 主要仪器 Olympus AU800 全自动生化分析仪，Sigma低温冷冻离心机，恒温水浴箱，电子天平，秒表，玻璃匀浆器，游泳用自制玻璃缸120 cm60 cm60 cm，小鼠饲养笼29 cm18 cm15 cm,购自苏州新区枫桥实验动物笼具厂。1.3 实验动物 成年雄性SD大鼠40只，体质量180220 g（南方医科大学实验动物中心提供，合格证号：粤检证字第2006A051）。实验前全部大鼠适应性喂养7 d，室温2226 ，相对湿度65%，明暗交替12 h，所有大鼠分笼饲养，4只/笼，自由饮水，标准饲料自由采食，动物实验室安静，实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。1.4 疲劳型亚健康大鼠模型的建立 参照负重强迫游泳部分睡眠剥夺复合因素方法建立疲劳型亚健康大鼠模型6。每天900将大鼠放入水深50 cm、水温（251） 的游泳箱里，按大鼠体重的5%负重进行1次力竭游泳（沉入水中10 s无法浮出水面即判定为力竭状态），并记录力竭游泳时间，1300将大鼠放入水深1.5 cm的小鼠饲养笼中，每笼1只大鼠，保持大鼠每天站在水中20 h（大鼠恶水而不能正常睡眠，即进行部分睡眠剥夺）

6、，在此期间大鼠可以自由进食饮水，于次日9：00将大鼠拿出正常饲养，连续4 d，即可造模成功。疲劳型亚健康大鼠模型确定：经过血生化、血常规及组织病理等检查，未发现模型大鼠明显病理变化，但此时大鼠已表现出疲劳、精神萎靡、反应迟钝、活力下降等，即为疲劳型亚健康状态。1.5 实验分组及给药方法 将40只大鼠随机分为5组，分别为正常对照组、模型对照组、维康颗粒高、中、低剂量组，每组8只。正常对照组不予任何处理。根据药物等效剂量公式计算大鼠给药剂量，维康颗粒高、中、低剂量组分别按照等效剂量的4倍（8.4 g/kg）、2倍（4.2 g/kg）、1倍（2.1 g/kg）给药。给药方法：大鼠造模的同时给予维康颗粒， 即每天1100灌胃1次， 连续4 d，观察其能否预防疲劳型亚健康的发生。模型组给予相应体积的生理盐水。1.6 观测指标1.6.1 大鼠行为表现主要观察大鼠的精神状态、活动情况、步态、饮食、二便以及爪、鼻唇、耳等色泽。1.6.2 大鼠疲劳程度以力竭游泳时间判断大鼠疲劳程度7。给予大鼠负重5强迫游泳至力竭，沉入水中10 s无法浮出水面即判定为力竭状态，记录力竭游泳时间。本实验中首次力竭游泳时间为

7、开始实验第1天大鼠的力竭游泳时间，此时大鼠为正常状态。末次力竭游泳时间为实验第4天大鼠的力竭游泳时间。通过观察首、末次力竭游泳时间确定大鼠是否处于疲劳状态。1.6.3 血浆乳酸的测定大鼠末次力竭游泳结束后1 h，立即10%()水合氯醛麻醉大鼠后腹主动脉采血，取血3 mL，加入肝素抗凝管，4 3 000 r/min离心10 min后取血浆，立即检测或放80 保存备用。按照试剂盒说明进行检测乳酸。1.6.4 血清尿素氮的检测大鼠末次力竭游泳结束后1 h，立即麻醉大鼠取腹主动脉血3 mL，加入普通生化管室温静置，室温放置待血清析出时，以3 000 r/min 离心10 min后留取血清，立即检测或放80 保存备用。应用自动生化分析仪检测血清尿素氮。1.7 统计方法 选用SPSS11.5统计软件进行数据统计分析，结果均以(s)表示，单因素方差分析，P<0.05为差异有显著性。2 结 果2.1 大鼠的行为表现 正常对照组大鼠神态安静，活泼好动，皮毛光洁整齐，眼睛有神，对食物敏感，逃避反应快。模型组大鼠精神萎靡，倦怠，嗜睡，皮毛欠光泽，大便稀，体质量减轻，食量下降，体型瘦弱，逃避反应能力明显

8、降低，对食物不敏感。与正常对照组大鼠比较，维康颗粒高、中剂量组大鼠的行为表现相似，而维康颗粒低剂量组大鼠略差一些；但与模型对照组大鼠比较，维康颗粒各剂量组大鼠的行为表现均明显要好。2.2 各组大鼠疲劳程度（首末次力竭游泳时间）的变化 各组的首次力竭游泳时间相比，差异无显著性（P>0.05），提示实验分组均衡。模型对照组大鼠首、末次力竭游泳时间差异有显著性（P<0.05），说明大鼠处于亚健康疲劳状态。与模型对照组比较，维康颗粒高、中、低剂量组大鼠末次力竭游泳时间差异有显著性（P<0.05），提示维康颗粒干预能显著提高大鼠末次力竭游泳时间。大鼠首、末次力竭游泳时间相比，维康颗粒中、低剂量组没有统计学差异（P>0.05），但维康颗粒高剂量组差异有显著性（P<0.05）；维康颗粒高、低剂量组大鼠末次力竭游泳时间比较差异有显著性（P<0.05）（见表1）。提示维康颗粒高、中、低剂量组均能预防大鼠亚健康疲劳的发生，且药物剂量越高预防效果越显著。表1 实验各组大鼠首末次力竭游泳时间比较（略）2.3 各组大鼠血乳酸和尿素氮的含量 与正常对照组比较，其他各组大鼠末次力

9、竭游泳结束后1 h血乳酸显著升高（P<0.05）。与模型对照组比较，维康颗粒高、中、低剂量组大鼠末次力竭游泳结束后1 h血乳酸差异均有显著性（P<0.05），维康颗粒可以明显降低大鼠运动后血乳酸水平。与正常对照组比较，除维康颗粒高剂量组外，其他实验各组大鼠末次力竭游泳结束后1 h血清尿素氮均显著增高（P<0.05）；与模型对照组比较，维康颗粒高、中、低剂量组大鼠血清尿素氮差异均有显著性（P<0.05）；维康颗粒高、低剂量组比较，尿素氮差异有显著性（P<0.05）（见表2）。提示维康颗粒可以明显降低大鼠运动后血清尿素氮水平，且药物剂量越高效果越明显。表2 实验各组大鼠血乳酸和尿素氮的含量（略）3 讨 论 虽然疲劳型亚健康与慢性疲劳综合征（CFS）的临床表现相似，但是两者不同。WHO已明确慢性疲劳综合征是一种疾病，不属于亚健康状态。目前现代医学对于亚健康的认识不深，其病理机制尚不清楚，缺乏有效的干预措施。中医学在疲劳型亚健康防治方面具有明显的优势。中医理论指出：“脾为后天之本，气血生化之源，主肌肉四肢”、“肝藏血，肝主筋，为罢极之本”、“肾为先天之本，生命之根，主骨生髓，为作强之官，伎巧出焉”。故认为疲劳型亚健康与中医肺、脾、肝、肾功能失调密切相关。在多年研究基础上，本课题组研制出防治疲劳型亚健康的中药复方维康颗粒8。本方以六味地黄丸的“三补”理论为基础化裁而来，由熟地、党参、淮山、山萸肉、黄精、陈皮等药物组成（已申请发明专利，受理号：2.6），方中熟地滋肾阴，益精髓，黄精润肺养阴，补脾益气共为君药，山萸肉滋肾益肝，淮山滋肾益气共为臣药，佐以党参益气健脾，使以陈皮行气化湿，共奏滋补肝肾、健脾润肺，益气养阴之功效。临床实践表

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