硫氧还蛋白融合表达系统表达的小鼠内皮抑素之纯化和生物学活性鉴定
11页1、硫氧还蛋白融合表达系统表达的小鼠内皮抑素之纯化和生物学活性鉴定马卫列,刘芳,何承伟,何振辉【关键词】蛋白Purificationofmouseendostatininthioredoxinfusionexpressionsystemandidentificationofitsbiologicalactivity【Abstract】AIM:Topurifymouseendostatinbyusingthioredoxinfusionexpressionsystemandtoidentifyitsbiologicalactivity.METHODS:ThepThioHisendorecombinantplasmidwastransformedintoBL21.AfterinductionwithIPTG,thioredoxinendofusionproteinwasexpressedinBL21andtheproductwasidentifiedasinclusionbodybySDSPAGE.Theexpressionproductwaspurifiedbyaffinitychromat
2、ographythroughNicolumn.Thepurifiedproteinwasdetectedbychickenchorioallantoicmembrane(CAM)angiogenesisinhibitoryassayandendothelialcellproliferationinhibitoryassay.RESULTS:HighpuritythioredoxinendostatinfusionproteinwasobtainedbySDSPAGaEnalysis.Thepurityoftheproteinwasover95%.TheproteinpossessedtheinhibitoryactivityofendothelialcellproliferationandinhibitedtheangiogenesisofCAMinhibitoryrate:,and.CONCLUSION:Themouseendostatinrecombinantfusionproteinexpressedinbyusingthioredoxinfusionexpressionsyst
3、emiseasytobepurifiedandpossesseshighactivity.【Keywords】endostatin;thioredoxinfusionexpressionsystem;fusionprotein【摘要】目的:将硫氧还蛋白融合表达系统表达的小鼠内皮抑素(endostatin)进行纯化并对其生物学活性进行测定.方式:将含有pThioHisendo重组质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG(异丙基BD硫代半乳糖甘)诱导表达重组融合蛋白,SDSPAG分析表达产物为包涵体,将包涵体纯化后通过镍柱亲和层析取得纯化的、可溶性的小鼠内皮抑素,经SDSPAGE析鉴定.将纯化的蛋白质通过鸡胚尿囊膜血管生成抑制实验和内皮细胞抑制实验对纯化的蛋白质进行生物学活性测定.结果:经SDSPAGE泳分析取得了高纯度的小鼠内皮抑素重组融合蛋白,纯度可达95%,得率为g/L.纯化的重组蛋白在体外能抑制鸡胚囊膜血管生成及具有抑制血管内皮细胞增殖的活性,加入重组蛋白内皮抑素5wg组与10wg组血管生成抑制率别离为%和,P<,和对照组通过方差分析,不同都有显著性意义;内皮细胞抑制实验可见不同
4、剂量重组蛋白内皮抑素对内皮细胞的生长具有抑制作用抑制率别离为,通过方差分析和相关性分析,具有剂量依托效应(r=,P<;.结论:用硫氧还蛋白融合表达系统在大肠杆菌中表达的小鼠内皮抑素重组融合蛋白易纯化并具有高活性.【关键词】内皮抑素;硫氧还蛋白融合表达系统;融合蛋白0引言内皮抑素(endostatin)是OReilly等1于1997年发觉的一种血管生成抑制剂,相对分子质量Mr为20000.Yamanaka2实验发觉,将含有内皮抑素基因的病毒注入小鼠脑瘤瘤体内可明显抑制肿瘤生长,减少瘤组织血管生成;刘江秋等3发觉,重组血管内皮抑素能抑制小鼠黑色素瘤生长、转移及新生毛细血管的形成.过去的抗癌药有较大的副作用,而内皮抑素通过与血管内皮细胞表面的整和素(integrin)结合抑制新生血管的形成4,操纵肿瘤细胞的生长和转移,对正常细胞没有任何不良阻碍.为了探讨内皮抑素用于肿瘤生物医治的可行性,咱们利用硫氧还蛋白融合表达系统在大肠杆菌中实现了对内皮抑素的高效表达,通过镍柱亲和层析对内皮抑素融合蛋白进行纯化,取得可溶性的内皮抑素融合蛋白,对纯化后的融合蛋白进行生物学活性鉴定,为以后大量生产及临床应
《硫氧还蛋白融合表达系统表达的小鼠内皮抑素之纯化和生物学活性鉴定》由会员公****分享,可在线阅读,更多相关《硫氧还蛋白融合表达系统表达的小鼠内皮抑素之纯化和生物学活性鉴定》请在金锄头文库上搜索。
高中新创新一轮复习生物通用版:课时检测七 物质跨膜运输的实例和方式 Word版含解析
110kV电力线路应急预案相关材料
春节后施工复工申请表及安全检查表(1)
常用医疗器械分类实例(第一类、第二类)
人教版八年级上册数学 第十一章 11.1.1三角形的边 导学案(无答案)
七夕情人节送女友什么礼物好-送女朋友千元内的七夕礼物推荐供参考
教你写吸引人的创业综合计划书
《新视野大学英语》 开学第一课_英语考试_外语学习_教育专区
幼儿园班主任工作总结范文集合5篇.doc
船舶电气控制设备项目创业计划书写作模板
大学生创业策划计划样本(2篇).doc
模拟电子技术基础课程设计说明书信号发生器
服务员转正工作总结(5篇)
2022年个人的辞职报告范文9篇
小学二年级语文教学工作3月份的工作总结3
2023年春节为题目的六年级作文600字
2023年面试注意事项
2023年项目管理个人述职报告(9篇)
半导体硅片抛光液项目可行性实施计划书
最新人教版语文七下记叙文阅读综合训练上课后练习及详解
2023-11-17 4页
2023-04-17 5页
2023-09-01 28页
2022-12-28 6页
2023-07-27 7页
2023-11-21 4页
2023-01-26 8页
2023-01-27 7页
2022-11-08 5页
2023-08-26 26页