维生素E和川芎嗪防治化学药物诱导的阿尔茨海默病的实验研究

1、维生素E和川芎嗪防治化学药物诱导的阿尔茨海默病的实验研究 啪蹄:分类号 单位代码:学 号:中国錾种失拳硕士学位论文题目:维生素和川芎嗪防治化学药物诱导的阿尔茨海默病的实验研究 ?研究生: 赵琳导 师: 金万宝学科专业: 药理学论文课题起止时间:年月一年月论文完成时间:年月中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料,与我一同工作的同志对本研究所做的任何奉献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料假设有不实之处,本人承当一切相关责任.口堪、日期:论文作者签名:筮.鲨中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学,且导师为通讯作者,通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保存并向国家有关

2、部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或局部内容保密内容除外,以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名:?签丝指导教师签名:赶主:匦维生素和川芎嗪防治化学药物诱导的阿尔茨海默病的实验研究刖 吾阿尔茨海默病 ,是老年人中最常见的神经退行性疾病之一,近几年科研人员就其发病机制和治疗方法进行了大量的研究,尚未发现十分有效的治疗药物。作为一种重要的抗氧化剂,维生素 ,以其价格低廉,平安性好等优点在的防治方面受到日益广泛的重视,但就其疗效尚存争议。川芎嗪,是中药川芎的主要成分,广泛应用于脑血栓、脑栓塞的治疗,关于其对的研究甚少,有研究说明其可以对抗东莨菪碱所致的记忆障碍,但作用机制不清。本实验研究和对模型鼠学习记忆能力的影响并检测相关指标的变化,探讨和对模型鼠的防治作用及作用机制。实验方法实验前应用水迷宫实验进行动物筛选,合格动物进行如下处理:应用一半乳糖?,.和亚硝酸钠 ?妇?,.制备模型,观察和的预防和治疗作用造模时间分别为天、天。在造模同时给予,?,.和,?,.以观察二者的预防作用。模型成功后给予,?一?一,.和,?一?一,.以观察二者的

3、治疗作用。末次给药结束小时后以水迷宫实验对各实验组小鼠进行行为学检测,连续记录天;行为学检测结束后一局部小鼠断头处死,生化法检测各实验组小鼠脑组织中胆碱酯酶、超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量;余下小鼠心脏灌流固定,染色观察各实验组小鼠脑组织形态学改变,免疫组织化学方法检测各实验组小鼠脑组?.、?的表达,但未显示出明显的预防作用。关键词阿尔茨海默病;小鼠;维生素;川芎嗪?二三运,., ,?.,?, ?., ?.,.?一,.一,. ,?一?一,?一?一 , ?., ,?一?一,?一?一, ., ? ., ?,.,?,? ,. . ?:, ,?,。?., ?, , ?,?., ?. .?:,?, ?,一 ., ?, ,?,?., ? . . ? , ?,? . ?.?, 一,? . .;?二囊匾:?,?。一、论 文、?.,维生素和川芎嗪防治化学药物诱导的阿尔茨海默病的实验研究刖 罱阿尔茨海默病 ,是一种常见的慢性进行性精神功能衰退性疾病,因患者多有记忆力、定向力及社会活动能力障碍,而且发病人数多,范围广,故已经成为老年医学中最棘手的问题,引起日益广泛的重视,已将其定为世纪五大重点疾病之一。发病

4、与基因遗传、氧自由基、铝蓄积、细胞凋亡、钙离子等多种因素有关,近几年科研人员就其发病机制和治疗方法进行了大量的研究,取得了显著的进展。的病理特征:脑神经细胞外出现一淀粉样肽聚集形成的神经斑或称老年斑、脑神经细胞内蛋白异常聚集形成的神经纤维缠结、脑皮层神经细胞减少以及累及皮层动脉和小动脉的血管淀粉样变性“。作为一种重要的抗氧化剂,维生素 ,以其价格低廉,平安性好等优点在的预防与治疗方面受到日益广泛的重视。国外虽有较多关于在防治方面的研究,但就其疗效尚存争议,且对在中作用机制的研究较少。川芎嗪,是中药川芎的主要成分,具有抗血小板聚集、扩张小动脉、改善微循环等作用,现已被人工合成,广泛应用于脑血栓、脑栓塞的治疗。关于对的研究甚少,有研究说明其可以对抗东莨菪碱所致的记忆障碍,但作用机制不清。本实验研究和对模型鼠学习记忆能力的影响并检测相关指标的变化,探讨和对模型鼠的防治作用及作用机制,为和在临床应用提供理论依据。?材料与方法一、实验材料.药品与试剂,/,公司;川芎嗪确山龙源药业有限公司,批号;亚硝酸钠沈阳市试剂三厂,批号;一半乳糖上海恒信化学试剂,批号;脑复康东北制药总厂,批号;蛋白定量测定试

5、剂盒、测定试剂盒南京建成生物工程研究所;兔抗鼠?片段多克隆抗体、?多克隆抗体均购自武汉博士德生物工程,免疫组化试剂盒购自福州迈新生物技术,显色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。.实验仪器一小鼠水迷宫中国医学科学院药物研究所研制;石蜡切片机一,浙江省金华市科迪仪器设备;光学显微镜?,紫外、可见分光光度计一型,尤尼柯上海仪器;/图像分析系统。.实验动物健康昆明种小鼠,雌雄兼用,体重,中国医科大学实验动物中心提供,试验动物生产许可证号:辽一,试验动物使用许可证号:辽一。二、实验方法.实验动物的筛选实验前应用水迷宫实验筛选合格动物。.一半乳糖和亚硝酸钠致模型小鼠的制备参照罗焕敏嘲的方法,腹腔注射一半乳糖/和亚硝酸钠/,每天一次。.实验动物分组和给药和预防作用分组和给药:空白对照组组、模型组组、阳性对照脑复康组组、低剂量组组、高剂量组组、低剂量组组、高剂量组组。组每日上午腹腔注射等体积的生理盐水;、组每日上午按/腹腔注射.%的一半乳糖和按/腹腔注射.%的亚硝酸钠;组每日下午加灌脑复康/,组每日下午加灌/,组每日下午加灌/,组每日下午加灌/,组每日下午加灌/,造模和给药同始终,共天。和治疗作

6、用分组和给药:空白对照组组、模型组组、阳性对照脑复康组组、低剂量组组、高剂量组组、低剂量组组、高剂量组组。组每日上午腹腔注射等体积的生理盐水,、组每日上午腹腔注射一半乳糖和亚硝酸钠;天后停止造模开始给药治疗:组每日上午灌服脑复康/,组每日上午灌服/,组每日上午灌服/,组每日上午灌服/,组每日上午灌服/妇,治疗给药天。.水迷宫实验进行行为学检测末次给药小时后一小鼠水迷宫检测各实验组小鼠的学习记 忆能力,水迷宫装置为 黑色有机玻璃槽,内设起点、终点台阶和多处盲端,水深,水温,分别记录各组小鼠从起点放入至找到台阶的时间逃避潜伏期,单位为,假设超过,那么以计。每日加长路程,连续记录天。.生化法对实验小鼠脑中含量、活力的测定水迷宫检测结束后一局部小鼠断头处死,冰盘上迅速剥离取脑,弃去小脑和嗅球,冰冷中洗去血迹,称重,以脑重:比例参加冷制成%组织匀浆液,匀浆液以离心,取上清液,保存,参照试剂盒说明书测定、活力和含量。.实验小鼠脑组织病理学检测及免疫组织化学方法对实验小鼠脑中?、?表达的测定余下小鼠以%水合氯醛/体重腹腔注射麻醉,开胸,在左心室插入灌注针头,同时剪开右心耳,先用生理盐水冲洗,再以多聚

7、甲醛固定液%多聚甲醛,./的缓冲液,.灌注固定,维持,然后迅速剥离大脑,进入多聚甲醛固定液中固定。标本进行梯度酒精脱水,透明,石蜡包埋组织块,常规切片,贴片,烤片,备用于染色及免疫组化。】?染色:石蜡切片经二甲苯逐级脱蜡,下行酒精至水,入苏木素染色液中盐酸酒精分化数秒后人伊红,梯度酒精脱水,二甲苯透明,树脂封片,光镜下观察脑组织结构变化。采用法进行实验小鼠脑组织免疫组织化学染色,一抗分别为兔抗小鼠?多克隆抗体、兔抗小鼠? 多克隆抗体;?抗体的稀释度为:,?抗体的稀释度为:,具体步骤按试剂盒说明操作,略加改良。为鉴别免疫反响信号的特异性,设立阴性对照,取局部脑切片不加一抗,仅放人抗体稀释液中,其他反响步骤相同。图像分析系统进行图像分析,以平均光密度值来代表各组小鼠脑中?、?表达情况。.统计学处理数据均以均数标准差又表示。采用.软件进行统计分析,多组间比拟采用单因素方差分析,多组间的两两比拟采用法。实验结果和对模型小鼠行为学和病理学的影响:应用水迷宫实验测试各实验组小鼠的学习记忆能力,观察和的预防与治疗作用。结果如下:.和对模型小鼠行为学和病理学的预防作用:染色结果显示,空白对照组可见大脑

8、皮质薄厚均匀,神经细胞染色均一,神经细胞结构清晰,核仁明显,结构清晰;模型组小鼠大脑皮质变薄,出现较多变形坏死的神经细胞胞质嗜酸性增强,胞核固缩,溶解、消失,多数神经细胞形状不规那么,局部神经核呈固缩状三角形或多角形,核内结构模糊,浅染,大量胶质细胞增生;阳性对照组可见大脑皮质偶有胶质结节,神经细胞清晰可见,局部细胞的核内结构模糊,染色较深;高、低剂量组可见大脑皮质厚薄均匀,神经细胞数目较模型组增多,大局部细胞形状典型;高、低剂量组大脑皮质仍然很薄,胶质细胞增生仍然很多,一局部神经细胞形状不规那么,局部神经核呈固缩状.。与正常对照组比拟,模型组小鼠逃避潜伏期明显延长,其差异具有显著性.与模型组比拟,高、低剂量组、阳性对照组小鼠逃避潜伏期均显著缩短,而与阳性对照组的逃避潜伏期无显著性差异,两个剂量组?】?间逃避潜伏期比拟无显著性差异喀;高、低剂量组与模型组比较小鼠逃避潜伏期无显著性差异.;实验结果提示、脑复康可预防小鼠的学习记忆能力损伤,而未显示此作用。.和对模型小鼠行为学和病理学的治疗作用:染色结果显示模型组小鼠大脑皮质变薄,并存在多个胶质结节,多数神经细胞形状不规那么,局部神经核呈固缩状,核内结构模糊,浅染;高、低剂量组可见大脑皮质厚薄均匀,神经细胞数目较模型组增多,胶质细胞大致正常分布,大局部细胞形状典型,结构清晰;阳性对照组可见大脑皮质偶有胶质结节,神经细胞清晰可见,局部细胞的核内结构模糊,染色较深;高、低剂量组仍有大量胶质细胞增生,一局部神经细胞形状不规那么,部分神经核呈固缩状.。与正常对照组比拟,模型组小鼠逃避潜伏期明显延长,其差异具有显著性.。与模型组比拟,高、低剂量组、阳性对照组小鼠逃避潜伏期显著缩短.,;两个剂量组的逃避潜伏期与模型组比拟均无显著性差异.;实验结果提示、脑复康可改善小鼠的学习记忆能力,而未显示出明显的治疗作用。和防治作用的机制探讨.和对实验小鼠脑组织中、活性及含量的影响.和预防作用:与空白对照组比拟:模型组小鼠脑中活性降低.、含量升高下降,含量增高。鐾 与模型组比拟,.

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