柱层析知识总结
4页1、柱层析知识总结柱层析利用层析柱将混合物各组分分离开来的操作过程称为柱层析。柱层析是层析技术中的一类,依据其作用原理又可分为吸 附柱层析、分配柱层和离子交换柱层析等。其中以吸附柱层析应用最广。以下只介绍吸附柱层析的相关问题,其操作方 法也可作为其他类型柱层析的参考。口1.吸附柱层析的器材口(1) 层析柱口实验室中所用的玻璃层析柱有两种形式:一是下部带有活塞的玻璃管,活塞的芯最好是聚四氟乙烯制作的,这样可 以不涂真空油脂,以免污染产品。如果使用普通的玻璃活塞,则真空油脂要小心地涂薄涂匀。另一种是将玻璃管下端拉 细,套上一段弹性良好的管子。这段管子必须是不能被淋洗剂溶解的,普通橡皮管一般不可充作此用,因为橡皮易被氯 仿、苯、THF等溶剂溶胀,而聚乙烯管子对大多数溶剂是惰性的,所以常常使用。用一只螺旋夹控制流速,此外,薄膜 塑料柱因使用方便、节省淋洗剂、减少蒸发量等优点,应用日趋广泛。薄膜塑料柱总是以扁平成卷保存的,两侧常有很 深的折痕。使用前需将裁取的一段薄膜管一端扎紧,另一端套在一段玻璃管上并用棉线扎紧。将这段玻璃管穿过一个单 孔塞。然后将薄膜管放进一根又粗又长,下端拉细了的玻璃管内,使塞
2、子塞紧大玻璃管的口。用水泵自大玻璃管下端抽 气,薄膜柱即因内部压强大于外部而自行展圆。待装入吸附剂后在其下部扎几个小孔即可使用。口层析柱的尺寸根据被分离物的量来确定,其直径与高度之比则根据被分离混合物的分离难易而定,一般在1 : 8到1 : 50之间。柱身细长,分离效果好,但可分离的量小,且分离所需时间长;柱身短粗,分离效果较差,但一次可以分离较 多的样品,且所需时间短。如果待分离物各组分较难分离,宜选用细长的柱子,如果要处理大量的较易分离的或对分离 纯度要求较低的混合物,则可选用粗而短的柱子。最常使用的层析柱,直径与长度之比在1 :8到1 : 15之间。口(2) 吸附剂口柱层析中最常使用的吸附剂是氧化铝或硅胶。其用量为被分离样品的3050倍,对于难以分离的混合物,吸附剂的 用量可达100倍或更高。对于吸附剂应综合考虑其种类、酸碱性、粒度及活性等因素,最后用实验方法选择和确定。口市售氧化铝有酸性、碱性和中性之分。酸性氧化铝是用1%盐酸浸泡后,用蒸馏水洗到其浸出液的pH值为4,适用 于分离酸性物质;碱性氧化铝浸出液的pH值为910,用以分离胺类、生物碱及其他有机碱性化合物。中性氧化铝的
3、相应pH值为7.5,适合于醛、酮、醌、酯等类化合物的分离以及对酸、碱敏感的其他类型化合物的分离。硅胶没有酸碱 性之分,可适用于各类有机物的分离。口柱层析所用氧化铝的粒度一般为100150目,硅胶为60100目,如果颗粒太小,淋洗剂在其中流动太慢,甚至 流不出来。口氧化铝和硅胶的活性各分五个等级。哪个活性级别分离效果最好,要用实验方法确定,而不是盲目选择高的活性级 别,最常使用的是IIIII级。如果吸附剂活性太低,分离效果不好,可通过活化”来提高其活性。所谓活化”就是指用 加热的方法除去吸附剂所含的水分,提高其吸附活性的过程。通常是将吸附剂装在瓷盘里放进烘箱中恒温加热。活化” 的温度和时间应根据分离需要而定。氧化铝一般在200C恒温4h,硅胶在105110C恒温0.51h。活化”完毕,切断 电源,待温度降至接近室温时,从烘箱中取出放进干燥器中备用。有的样品在活性高的吸附剂中分离效果不好,可将吸 附剂放在空气中让其吸收一些水分,分离效果反而好一些。口此外,一些天然产物带有多种官能团,对微弱的酸碱性都很敏感,则可用纤维素、淀粉或糖类作吸附剂。活性碳是 一种吸附能力很高的吸附剂,但因粒度太小而
4、不常用。(3)淋洗剂口淋洗剂是将被分离物从吸附剂上洗脱下来所用的溶剂,所以也称为洗脱剂或简称溶剂。其极性大小和对被分离物各 组分的溶解度大小对于分离效果非常重要。如果淋洗剂的极性远大于被分离物的极性,则淋洗剂将受到吸附剂的强烈吸 附,从而将原来被吸附的待分离物顶替”下来,随多余的淋洗剂冲下而起不到分离作用;如果淋洗剂的极性远小于各组 分的极性,则各组分被吸附剂强烈吸附而留在固定相中,不能随流动相向下移动,也不能达到分离的目的。如果淋洗剂 对于被分离物各组分溶解度太大,被分离物将会过多、过快地溶解于其中并被迅速洗脱而不能很好地分离;如果溶解度 太小,则会造成谱带分散,甚至完全不能分开。常用溶剂的极性大小次序也因所用吸附剂的种类不同而不尽相同,很多 资料给出了在硅胶和氧化铝柱中常用溶剂所表现出的极性次序,可作为选择溶剂的参考,首先在薄层层析板上试选,初 步确定后再上柱分离。如果所有色带都行进甚慢则应改用极性较大溶解性能也较大的溶剂,反之则改用极性和溶解性都 较小的溶剂,直至获得满意的分离效果。口除了分离效果外还应当考虑:在常温至沸点的温度范围内可与被分离物长期共存不发生任何化学反应,也不被
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