YPF调节小鼠过敏性鼻炎的作用机制研究

1、 YPF调节小鼠过敏性鼻炎的作用机制研究 Summary：目的 研究玉屏风散（YPF）对小鼠过敏性鼻炎（AR）的影响。方法 Balb/c小鼠分为对照组（NC）、AR组、YPF组、地塞米松组。AR和Dex组灌胃给药进行治疗。治疗结束后，记录挠鼻和打喷嚏次数；HE观察鼻黏膜炎细胞浸润；ELISA检测血清中IL-4、IL-13、IL-17和OVA-sIgE的水平；流式细胞术检测脾脏中Treg比例。结果 经YPF治疗后，HE结果显示小鼠鼻粘膜炎性细胞浸润降低；小鼠挠鼻和打喷嚏次数、血清IL-4、IL-13、IL-17、OVA-sIgE、Treg较AR组显著降低（p0.01）。结论YPF可上调脾脏中Treg比例，降低血清OVA-sIgE、IL-4、IL-5、IL-13水平，缓解小鼠AR症状。Keys：过敏性鼻炎；YPF；Treg；2型免疫反应过敏性鼻炎（AR）临床主要表现阵发性或反复发作的打喷嚏、鼻塞、鼻痒等；研究认为机体内多种免疫细胞和细胞因子在外源性抗原刺激下的异常激活是AR发病的主要机制1。AR发病率近年来呈现逐渐上升趋势，已成为一种危及全球的过敏性疾病2。玉屏风散（YPF）具有益气、固表

2、等功效，常用于表虚不固而外感风邪的治疗。我们基于卵清蛋白（OVA）诱导的小鼠AR模型，探讨了YPF对AR的调节作用。1材料与方法1.1动物、试剂Balb/c小鼠购自广东省实验动物中心，实验动物生产许可证编号SCXK（粤）2013-0002。防风、黄芪、白术（炒）三味药物由深圳市龙岗区耳鼻咽喉医院中药房提供。地塞米松（Sigma-Aldrich）；IL-4、IL-10、IL-13、IL-17和OVA-sIgE试剂盒（武汉华美）；流式CD4、Foxp3、CD25抗体（Biolegend），达优小鼠淋巴细胞分离液（深圳市达科为生物工程有限公司）。1.2 AR造模及分组AR小鼠模型造模Reference方法进行3。AR模型造模成功后，随机分为AR组、YPF组（原药材3.6 g/kg）、Dex组（3 mg/kg），每组6只。YPF组、Dex组灌胃给药每天1次。1.3小鼠鼻炎症状评价指标最后一次给药后，OVA溶液滴鼻对小鼠鼻腔进行局部刺激，随即观察小鼠挠鼻和打喷嚏的次数；HE染色分析小鼠肺组织炎症细胞浸润情况；ELISA检测小鼠血清中IL-4、IL-13、IL-17、OVA-sIgE水平；流式细胞

3、术检测脾脏中Treg比例。1.4统计学分析 采用Graphpad Prism 5.0软件对上述获得研究实验数据进行处理、作图，组间比较采用单因素方差分析，实验数据以x s表示，p0.05视为有显著性差异。2 结果2.1 YPF对AR小鼠行为学的影响AR组小鼠15分钟内挠鼻和打喷嚏次数较NC组显著上升（p0.01）；经YPF治疗后，挠鼻和打喷嚏次数显著下降（p0.01，图1B）。图1 YPF对AR小鼠挠鼻和打喷嚏行为影响OVA诱导的AR组挠鼻和打喷嚏次数均较对照组显著升高；#p 0.01 vs. NC，*p 0.01vs. AR；n = 6。 2.2 YPF对AR小鼠鼻黏膜的影响 HE染色结果显示（见图2），NC组小鼠鼻黏膜中炎细胞浸润较少，AR小鼠鼻黏膜增厚，炎性细胞浸润较为严重，YPF及Dex组小鼠鼻黏膜厚度减轻，炎性细胞浸润状况改善。图2 YPF对OVA诱导的AR小鼠鼻粘膜形态学和炎性细胞浸润的影响2.3 YPF对AR小鼠血清中过敏因子的调节作用AR模型组中，血清OVA-sIgE、IL-4、IL-13和IL-17水平分别显著高于正常组（p0.01）；与AR组比较，YPF组小鼠血清中

4、OVA-sIgE、IL-4、IL-13和IL-17水平较AR组明显降低（见图3A-D，p0.01）。图3 YPF对AR小鼠血清中过敏性细胞因子的影响#p 0.01 vs. NC, *p 0.01, vs. AR；n = 6。2.4 YPF对AR小鼠脾脏中Treg的影响流式细胞术结果显示，经YPF治疗后，CD4+CD25+ Foxp3+ Treg比例显著上升至对照组水平（p0.01，见图4）。图4 YPF对AR小鼠脾脏中CD4+CD25+ Foxp3+ Treg比例的影响#p 0.01 vs. NC, *p 0.01, vs. AR；n = 6。3 讨论中医药领域的广大学者对YPF治疗AR的机制进行了广泛的研究，但YPF治疗AR的免疫学机制有待进一步研究。调节性T细胞（Treg）通过限制效应反应的程度并建立免疫耐受，调节免疫系统的平衡，对于维持免疫系统的平衡至关重要4。我们研究发现，YPF治疗明显逆转OVA诱导上调的血清Th2型细胞因子、IL-17和OVA-sIgE的水平，减轻鼻粘膜炎性细胞的浸润，减少过AR小鼠挠鼻和打喷嚏的次数。流式细胞术结果表明，YPF治疗可以恢复Treg至正常组水

5、平。综上所述，YPF可通过恢复AR小鼠体内Treg水平，调节机体2型免疫，改善AR症状。Reference:1赵霞, 张杰, 秦艳虹, et al. 儿童变应性鼻炎中西医结合诊疗指南J. 南京中医药大学学报. 2023, 39(3): 274-284.2Bousquet J, Anto J M, Bachert C, et al. Allergic rhinitisJ. Nature Reviews Disease Primers. 2020, 6(1): 95.3Wang Y X, Gu Z W, Cao Z W, et al. Nonylphenol can aggravate allergic rhinitis in a murine model by regulating important Th cell subtypes and their associated cytokinesJ. Int Immunopharmacol. 2019, 70: 260-267.4Goswami T K, Singh M, Dhawan M, et al. Regulatory T cells (Tregs) and their therapeutic potential against autoimmune disorders Advances and challengesJ. Human Vaccines & Immunotherapeutics. 2022, 18(1): 2035117.程保辉（1982-），男，汉族，河南商丘人，博士，副主任药师，深圳市龙岗区耳鼻咽喉医院，研究方向：中药免疫学。曾宪海通信作者（1975-），男，汉族，辽宁大连人，主任医师，深圳市龙岗区耳鼻咽喉医院，研究方向：耳鼻咽喉疾病。基金项目：国家自然基金（81973915、81773978），深圳市医学重点学科建设经费资助(NO.SZXK039)、龙岗区医疗卫生科技计划项目（LGKCYLWS2020092）。深圳市龙岗区耳鼻咽喉医院耳鼻咽喉科 & 深圳市耳鼻咽喉研究所，深圳，广东 518172 -全文完-

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