猴雌二醇E2酶联免疫分析ELISA
8页1、猴雌二醇 (E2) 酶联免疫分析( ELISA )试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定猴血清,血浆及相关液体样本中雌二醇 (E2)的含量。实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猴雌二醇(E2) 水平。用纯化的猴雌二醇(E2) 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入雌二醇(E2) ,再与 HRP 标记的雌二醇 (E2) 抗体结合,形成抗体 -抗原 -酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的雌二醇 (E2) 呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度( OD 值),通过标准曲线计算样品中猴雌二醇(E2) 浓度。试剂盒组成 :试剂盒组成48 孔配置96 孔配置保存说明书1 份1 份封板膜2 片( 48)2 片( 96)密封袋1 个1 个酶标包被板1 481 962-8保存标准品: 72pmol/L0.5ml 1 瓶0.5ml 1 瓶2-8保存标准品稀释液1.5ml 1 瓶1.5ml 1 瓶2-8保存酶标试剂3 ml 1 瓶6 ml 1 瓶2
2、-8保存样品稀释液3 ml 1 瓶6 ml 1 瓶2-8保存显色剂 A液3 ml 1 瓶6 ml 1 瓶2-8保存显色剂 B液3 ml 1 瓶6 ml 1 瓶2-8保存终止液3ml 1 瓶6ml 1 瓶2-8保存浓缩洗涤液( 20ml 20 倍) 1 瓶(20ml 30 倍) 1 瓶2-8保存样本处理及要求:1. 血清:室温血液自然凝固 10-20 分钟,离心 20 分钟左右 ( 2000-3000 转 /分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20 分钟后,离心20 分钟左右( 2000-3000 转 /分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。3. 尿液:用无菌管收集,离心20 分钟左右( 2000-3000 转 /分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20 分钟左右( 2000-3000 转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4 )稀释细胞悬液,细
3、胞1浓度达到 100 万 /ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左右( 2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8的温度。加入一定量的 PBS( PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 /分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于 -20保存,但应避免反复冻融 .7. 不能检测含 NaN3的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的( HRP)活性。操作步骤1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10 孔,在第一、第二孔中分别加标准品 100l,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50l,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取 100l 分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50l,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50
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