使用细胞工厂与10L转瓶培养Vero细胞和产毒情况
5页1、使用细胞工厂与10L 转瓶培养 Vero 细胞和产毒情况比较细胞工厂与10L 转瓶培养 Vero 细胞和产毒情况一、实验目的1、了解熟悉细胞工厂的使用,清洗及再利用的方法 ;2、比较细胞工厂与10L 转瓶同等条件下培养Vero 细胞时各自细胞的生长状态3、比较细胞工厂与10L 转瓶培养 Vero 细胞加毒之后细胞的状态变化和产毒情况;4、通过实验分析用细胞工厂代替原有转瓶生产优缺点;5、通过实验发现细胞工厂中常见问题。二、主要实验工具及材料2 干净的 10L 转瓶一个 ( 表面积约为 2278?);2NUN公司4层细胞工厂一个(表面积为2520?,编号:140360),自带一个插拔塞和旋口塞细胞生长液;细胞维持液;毒种(CTN-1V株工作种子批毒种)三、实验过程( 一 ) 培养Vero 细胞,观察分析及注意事项5 将一瓶已长成致密单层细胞消化,制备成细胞悬液,计数后,按照每 ml 溶液含有1X10个细胞数,及每平方厘米贴壁细胞数相同,根据面积比计算出加入ml数。加入细胞后放置于37?恒温室中培养。6细胞悬液浓度:2.32 X 10个/ml2溶液总体积(ml)加入细胞悬液体积(ml)面积
2、细胞数(个/cm)细胞工厂80034.48 10L 转瓶 1500 31.03观察、分析2010-8-511:00 加入细胞和培养液于细胞工厂和 10L 转瓶中培养13:30观察:细胞工厂中的贴壁细胞数量较10L转瓶多,溶液中含有大量的悬浮细胞 分析 : 细胞工厂是静置培养,细胞贴壁较10L 转瓶快2010-8-69:10 观察细胞工厂 : 细胞状态良好,已伸展,分布均匀10L 瓶 : 细胞状态一般,少许伸展,分布稍有不均分析 :10L 转瓶中的细胞贴壁不均匀,可能是由于细胞总数较少造成( 二 ) 加入病毒后,Vero 细胞状态的观察分析2010-8-99:30 观察 (加毒前 )细胞工厂 : 细胞生长成致密单层,间隙很小,排列整齐,分布均匀 10L 转瓶 : 细胞生长成致密单层,间隙很小,排列较整齐,分布稍有不均匀加毒前更换培养液为维持液,再根据比例加入 3.1ml(10L 转瓶 )3.4ml( 细胞工厂)病毒2010-8-10 9:00 观察细胞工厂与转瓶中的细胞无明显变化,状态正常,轮廓清晰2010-8-11 9:30 观察细胞工厂与转瓶中的细胞状态正常,无明显病变,无悬浮细胞;
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