膨润土絮凝法精制刺五加水提液的研究

1、膨润土絮凝法精制刺五加水提液的研究【摘要】 目的考察膨润土絮凝剂对刺五加水提液的澄清效果。方法将膨润土用于刺五加水提液的澄清，以水提液中有效成分总黄酮的保留率及浸出物得率为考察指标，并与醇沉法进行比较。结果膨润土絮凝法与醇沉法同样能使药液澄清，能有效降低总固形物的量，而对水提液总黄酮的保留率要优于醇沉法。结论膨润土絮凝剂可用于刺五加水提液的澄清工艺。 【关键词】 刺五加水提液； 絮凝； 膨润土； 总黄酮刺五加主要分布在我国的东北和华北等地，为五加科植物刺五加Acanthopanax senticosus（Rupr.et Maxim） Harms syn的干燥根和根茎，具有补中益气、健脾补肾，安神醒脑的功效，用于脾肾阳虚、体虚乏力、食欲不振、腰膝酸痛、失眠多梦等病症，其中刺五加中所含总黄酮是其有效成分，刺五加制剂在神经官能症、神经衰弱、高脂血症、冠心病、脑血栓、心绞痛、低血糖等疾病的治疗中均具有显著疗效1。 刺五加水提液生产工艺中采用中药制剂常用的水提醇沉澄清工艺，不仅需要消耗大量的乙醇，生产成本高，乙醇回收复杂，而且易造成有效成分的损失，影响制剂的疗效。膨润土是一种具有层状结构的水合镁

2、铝硅酸盐非金属黏土矿物，作为一种天然的澄清剂，资源丰富，安全无毒2,3。为了最大限度地保留刺五加水提液的有效成分，本实验采用膨润土作为刺五加水提液的絮凝剂，用于刺五加提取液的絮凝和精制，选择总固形物和黄酮总含量作为评价指标，并与传统醇沉法进行比较。1 仪器和材料 722型可见分光光度计（上海精密仪器仪表有限公司）；电热恒温鼓风干燥箱（山东潍坊医药集团股份有限公司医疗器械厂）；ESJ 210-4型电子天平（沈阳龙腾电子称量仪器有限公司）。刺五加根和茎饮片（产地黑龙江）；芦丁对照品（批号0080-9705，中国药品生物制品检定所）；膨润土（化学纯，上海四试赫维化工有限公司）；无水乙醇、硝酸铝、亚硝酸钠等试剂均为分析纯。2 方法和结果2.1 絮凝剂溶液的配制准确称取5 g膨润土，用100 ml蒸馏水浸泡24 h，使之充分吸水分散成胶体悬浮液，即得5%（W/V）的膨润土悬浊液。2.2 刺五加水提液的制备称取干燥刺五加药材100 g，加蒸馏水500 ml，浸泡30 min后，煎煮1 h，滤过后，挤干滤渣，滤渣再煎煮1 h，合并两次滤液，加热浓缩至每毫升煎剂含生药0.2 g。2.3 刺五加水提液中

3、总黄酮含量的测定42.3.1 标准曲线的绘制精密称取在120干燥至恒重的芦丁对照品9.8 mg，置50 ml量瓶中，加60乙醇适量，超声处理使溶解，放冷，用60乙醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。精密量取对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml分别置25 ml量瓶中, 加60乙醇溶液至6 ml，加5亚硝酸钠溶液1 ml，摇匀，放置6 min，加10硝酸铝溶液1 ml，摇匀，放置6 min，再加4%氢氧化钠溶液10 ml，用60乙醇稀释至刻度，放置15 min，以相应的溶液为空白，在波长510 nm处测定吸光度。重复测定3次，以吸光度为纵坐标，以浓度为横坐标，绘制标准曲线。得回归方程：Y=11.199X0.066 2，Y为浓度mg/ml；X为吸光度；相关系数r=0.999 4，n=5，说明在7.8410-3 3.9210-2 mg /ml范围内线性关系良好。2.3.2 总黄酮含量的分析精密量取“2.2”项刺五加水提液0.25 ml置于25 ml量瓶中，加60乙醇溶液至6 ml，加入5亚硝酸钠溶液1 ml，摇匀，放置6 min，再加入10%硝酸铝溶液1 ml，摇匀，放置6

4、min，再加入4%氢氧化钠溶液10 ml，用60%乙醇稀释至刻度，放置15 min，以相应的溶液为空白，在波长510 nm处测定吸光度。根据回归方程分别计算澄清前后刺五加水提液中总黄酮含量。并按下式计算有效成分总黄酮保留率：总黄酮保留率（%）=澄清后药液总黄酮的量（g）/澄清前药液总黄酮的量（g）100%。2.3.3 固形物收率的测定精密量取刺五加水提液25 ml，置于干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后于105烘箱中干燥至恒重，在干燥器中放置30 min，迅速称重，与絮凝处理前样品液中的固形物相比，计算固形物收率。2.4 水提液浓缩比的选择取浓缩至生药量（g）与药液体积（ml）比为11，12，15，110的提取液各25 ml，分别加入絮凝剂2.5 ml，于室温下搅拌1 h，在室温下静置24 h后将膨润土及沉淀物分离，观察药液的澄清度，过滤，测定滤液中固形物总量及总黄酮含量。刺五加水提液浓缩比对絮凝效果的影响结果见表1。结果表明，药液浓度过大时，由于溶液粘稠，加入絮凝剂后，不利于大分子的分散，因而澄清效果较差。而提取液浓度较稀时，澄清效果较好，而且总黄酮损失不大，但当药液浓度过稀时，后续处

5、理过程较为复杂。因此，将水提液浓缩比定为15较为合理。表1 水提液浓缩比对絮凝效果的影响（略）2.5 絮凝剂用量的考察精密量取“2.2”项刺五加水提液各6份，每份50 ml，在室温及相同的搅拌速度下，分别加入絮凝剂1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml，于室温下搅拌1 h，在室温下静置24 h后观察药液的澄清度，过滤，测定滤液中固形物总量及总黄酮含量。结果见表2。 结果表明，随着刺五加水提液中膨润土加入量的增大，得到的固体物总量明显减少，水提液更为澄清。当膨润土絮凝剂加入量高于2 ml时，药液由浑浊变澄清。随着刺五加水提液中膨润土加入量的增大，药液中有效成分总黄酮含量降低，当膨润土加入量高于4 ml时，总黄酮含量趋于稳定。综合考虑药液澄清度和总黄酮保留率，最佳的膨润土加入量为2 ml，这时，药液澄明情况良好，并且沉淀易于过滤，药液中有效成分总黄酮的含量较高，总黄酮的保留率较好。表2 絮凝剂加入量对絮凝效果的影响（略）2.6 乙醇沉淀法与膨润土絮凝工艺的比较精密量取“2.2”项刺五加水提液各3份，每份25 ml，其中1份加入膨润土絮凝剂2 ml，另两份分别加入无水乙醇，使醇含量分别

6、达到50%和70%，在室温下各静置24 h后，过滤，蒸去乙醇，将滤液浓缩至25 ml，分别测定固形物总量和总黄酮含量，膨润土澄清刺五加水提液与醇沉工艺比较结果见表3。表3 醇沉与膨润土絮凝的效果比较（略）结果表明，醇沉和膨润土絮凝工艺澄清效果基本相同，但膨润土絮凝工艺在总黄酮保留率方面优于醇沉工艺。醇沉工艺乙醇用量大，而且醇沉造成了总黄酮的损失较多，并且沉降时间较长，不利于生产效率的提高。而采用膨润土絮凝，沉降速度快，生产周期短。3 讨论 膨润土由不溶性带负电荷的硅酸盐小片组成，吸水膨胀会形成稳定的带负电荷的胶体悬浮物，具有膨胀性和层间永久负电荷等特点，可有效吸附蛋白质及其他带正电荷的胶体离子而产生凝聚作用。当膨润土以水悬浮体的薄片形式存在时，具有较大的比表面积，能够利用范德华力通过吸附架桥和电中和中药水提液中的大分子杂质，以达到分离、纯化的目的。膨润土具有选择性吸附能力，利用其带负电荷的性质可减少对小分子有效成分的吸附，因此，可以用于选择性絮凝中药水提液。 传统的水提醇沉法工艺需要大量乙醇，过滤稍有困难，并且需要对乙醇进行回收处理。而采用膨润土絮凝剂澄清刺五加水提液，絮凝剂用量少，沉降速度快，絮凝周期短，絮凝沉淀颗粒大，易过滤。 采用膨润土澄清刺五加水提液，絮凝剂的加入量非常关键，膨润土加入量以每升刺五加水提液加入2.5 g膨润土为宜，其总黄酮保留率为94%，而采用醇沉工艺后总黄酮保留率为82%。膨润土絮凝法能较好保留刺五加水提液中的有效成分，是一种有效的中药精制方法。【参考文献】 1王志睿,林敬明,张忠义.刺五加化学成分与药理研究进展J.中药材,2003,26(8)：603.2张建伟,王中原,肖斌. 膨润土纯化黄芩苷水提液的研究J.中草药,2006,37(2)：1802.3徐向彩, 狄留庆, 谈献和,等.皂土澄清剂处理对黄芪浸膏粉吸湿性的影响J.中国中医药信息,2006,13(2)：42.4张正康.分光光度法测定刺五加茎中黄酮含量J.时珍国医国药,1999,10(12)：884. / 文档可自由编辑打印

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