玉米赤霉烯酮降解酶产品标准

玉米赤霉烯酮降解酶产品标准（草案）前言本标准根据 GB/T 1.1-2009 进行编写。本标准由真独解（杭州）生物技术工程有限公司提出。本标准由真独解（杭州）生物技术工程有限公司起草。本标准的主要起草人：王升新、杨文杰。本标准由真独解（杭州）生物技术工程有限公司负责解释。本标准于 2021 年 07 月 20 日首次发布。玉米赤霉烯酮降解酶产品标准1 1范围范围本标准规定了玉米赤霉烯酮降解酶的用途与用量、要求、试验方法、检验规则、标签、包装、运输与贮存。本标准适用于以经微生物发酵、提取的玉米赤霉烯酮降解酶与载体混合后制成的玉米赤霉烯酮降解酶产品。2 2规范性引用文件规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6435 饲料水分和其它挥发性物质含量的测定GB 10648饲料标签GB 13078饲料卫生标准GB 13079 饲料中总砷的标准GB/T 14699.1 饲料 采样GB/T 13093饲料中细菌总数的检测NY/T 722饲料用酶制剂通则GB/T 18823饲料检测结果判定的允许误差JJF 1070 定量包装商品净含量计量检验规则定量包装商品计量监督管理办法（国家质量监督检验检疫总局令）饲料添加剂品种目录（中华人民共和国农业部公告）3 3术语和定义术语和定义3.13.1 玉米赤霉烯酮分解酶活性单位玉米赤霉烯酮分解酶活性单位在 35，pH8.0 的条件下，每分钟转化 1ng 的玉米赤霉烯酮所需的酶质量，即为一个玉米赤霉烯酮分解酶活性单位，以 U 表示。4 4技术要求技术要求4.14.1感官指标感官指标本品无发霉、变质、虫害现象，无杂物。4.24.2技术指标技术指标应符合表 1 规定表 1 质量指标项目指标玉米赤霉烯酮降解酶活性/U/g1000000水分/%94.34.3卫生指标卫生指标应符合表 2 规定。表 2 卫生指标项 目指标总砷/mg/Kg2.0细菌总数/CFU/g2.01065 5试验方法试验方法5.1 一般试剂和水5.1一般试剂和水，未注明其要求时，均指分析纯试制和符 GB/T 6682 中规定的三级水，色谱分析中所有水均为符合 GB/T 6682 中规定的一级水。5.2试剂和溶液5.2.15.2.1 甲醇:色谱纯。5.2.25.2.2 乙腈:色谱纯。5.2.3 玉米赤霉烯酮标准品:CAS：17924-92-4纯度98%。5.2.4 玉米赤霉烯酮标准储备液:取 5.0mg 玉米赤霉烯酮标准品于试剂瓶，准确加入 1mL 甲醇(5.2.1)，振荡使玉米赤霉烯酮充分溶解。密封后避光冷冻保存，有效期 12 个月。5.2.5 玉米赤霉烯酮标准工作液：准确移取标准储备液 100L,加甲醇(5.2.1)定容至 10mL，稀释成浓度为 50ug/mL 的玉米赤霉烯酮工作液，密封后避光 4保存，三个月内有效。5.2.6 玉米赤霉烯酮标准系列溶液：分别准确移取标准中间液适量，加甲醇(5.2.1)稀释至 1mL,摇匀，使玉米赤霉烯酮的浓度为 500ng/mL、1000 ng/mL、2000 ng/mL、5000ng/mL、10000ng/mL 标准系列溶液现用现配。5.2.8 玉米赤霉烯酮降解酶缓冲液：Tris-HCl 缓冲液，称取 Tris 试剂 3.03g，氯化钠8.76g，加纯水 900mL，用纯盐酸调整 ph 为 7.5，定容至 1000mL，用 0.5mol/L氢氧化钠微调 pH 至 8.0。4.2.9 BSA 溶液：称取 BSA 100mg，用上述缓冲液定容至 100mL，此时溶液浓度为 10mg/mL。5.2.10 1%次氯酸钠溶液(消毒用)。5 5.3 3仪器与设备仪器与设备5.3.15.3.1 分析天平:感量 0.0001g。5.3.25.3.2 pH 计:精确至 0.01。5.3.35.3.3 水浴锅：可控温度 351。5.3.45.3.4 旋涡振荡器。5.3.55.3.5 移液器:ImL、200L 和 20L 移液器，分别精确至 1L、0.lL 和 0.01L。5.3.65.3.6 计时器。5.3.75.3.7 0.22m 尼龙滤膜。5.3.85.3.8 液相色谱仪:具荧光检测器。5 5.4 4外观的测定外观的测定称取试样 50g 置于洁净的白瓷盘中，在光线充足、无外界干我的条件下，用目测、手感等方法，进行评定。5 5.5 5酶酶活活性性的的测测定定5.5.15.5.1 原理原理在规定的条件下，玉米赤霉烯酮降解酶可降解玉米赤霉烯酮。反应液过 0.22m 尼龙滤膜，用具荧光检测器的高效液相色谱仪分析，外标法定量。检测试样反应组和试样对照组中所残留的玉米赤霉烯酮含量，计算出酶活力。5.5.25.5.2 测定步骤测定步骤5 5.5 5.2 2.1 1试样溶液的制备试样溶液的制备准确称取试样 1g(精确至 0.01g)，置于 100mL 棕色容量瓶中，加入 50mL 降解酶缓冲液（5.2.8），充分溶解定容至 100mL,摇匀。得到浓度为 10mg/mL 的待测液。5 5.5 5.2 2.2 2反应反应取离心管按下面的顺序进行操作，每个样品设置对照组和反应组，对照组和反应组玉米赤霉烯酮底物溶液加入的时间间隔应保持一致。操作步骤见表 3。步骤方法 1对照组反应组1.加入缓冲液800L700L2.加入待测试样溶液-100L3.加入 BSA 溶液100L100L4.加入 50g/mL 玉米赤霉烯酮底物溶液100L100L5.混合6.35反应 120min7.95反应 5min 灭活酶8.冷却至室温9.混合5 5.5 5.2 2.3 3试样净化试样净化上述反应液经过 0.22m 尼龙滤膜，待测定。5 5.5 5.2 2.4 4测定测定5 5.5 5.2 2.4 4.1 1色谱条件色谱条件色谱柱:100mm2.1mm,1.8m,C18,或性能相当的色谱柱。柱温:40。流动相:甲醇：乙腈：水=8：46：46流速:0.2mL/min.进样量:10L。荧光检测器:激发波长:274nm,发射波长:440nm。5.5.2.45.5.2.4 定量测定定量测定按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数，向色谱仪中注入玉米赤霉烯酮标准液及试样溶液，得到色谱峰面积响应值，采用单点或多点校正，外标法定量。5.5.35.5.3 结果计算结果计算试样中玉米赤霉烯酮降解酶酶活性 X，按式(1)计算，单位为 U/g:(0)式中:=1000V：上机前溶液体积，单位：mL；m:反应时降解酶试样质量，单位:mg:C0:样品对照组的玉米赤霉烯酮浓度，单位:ng/mLC:样品反应组的玉米赤霉烯酮浓度，单位:ng/mL;t:反应时间，单位:min;1000:换算系数计算结果以平均值表示，结果保留整数。5.5.45.5.4 重复性重复性同一分析者对同一试样同时两次平行测定结果的相对偏差不超过 20%。5.5.55.5.5 清洁和消毒清洁和消毒5 5.5 5.5 5.1 1耗材的消毒耗材的消毒所有污染了玉米赤霉烯酮的耗材，包括塑料和玻璃制品，橡胶手套等，均须浸泡在 1%次氯酸钠溶液中，半天后丢弃。实验过程中使用的枪头等低值耗材均为一次性使用，避免反复使用。5 5.5 5.5 5.2 2实验设备的消毒实验设备的消毒不宜浸泡消毒的设备，如移液枪，须用蘸有 1%次氯酸钠溶液的抹布擦拭。5 5.5 5.5 5.3 3实验台面的消毒实验台面的消毒所有用过的实验台面须喷洒 1%次氯酸钠溶液，静置半个小时后，再擦拭干净。5 5.6 6水分的测定水分的测定按 GB/T 6435 执行。5 5.7 7总砷的测定总砷的测定按 GB/T 13079 执行。5 5.8 8细菌总数的测定细菌总数的测定按 GB/T 13093 执行。6 6 检验规则检验规则6 6.1 1批次批次以每一班次生产且经包装的、具有同样工艺条件、同批号、规格的产品为一个批次。6 6.2 2取样的方法取样的方法按 GB/T 14699.1 的规定进行采样，从每批产品的包装中随机抽取。用清洁适用的取样工具伸入所取样品的四分之三深处，用交叉法取出足够量的样品，将采得的样品充分混合均匀，按四分法缩分至 500g,分装入两个清洁，干燥的具塞样品瓶或密封袋中，贴上标签，注明生产日期、产品批号、取样日期、取样人员。一份送交实验室用于检验，另一份密封避光保存，作留样观察用。6 6.3 3出厂检验出厂检验出厂检验项目包括:外观、玉米赤霉烯酮降解酶活性、水分检验合格后并且附合格证和使用说明书方可出厂。6 6.4 4型式检验型式检验一般情况下，产品应每年进行一次型式检验，但有下列情况之一时，亦应进行型式检验:a)国家质量监督机构或饲料行政主管部门提出型式检验要求时；b)审发生产许可证、产品批准文号时；c)更改主要原辅料材料，工艺过程及主要设备有较大变化时；d)新试剂的产品或正常生产的产品停产 3 个月以上，恢复生产时；e)当用户对产品质量有较大异议时。6 6.5 5判定规则判定规则6.5.1 当产品中的卫生指标(总砷、细菌总数)有一项不合格时，判整批产品不合格。6.5.2 除卫生指标以外的其他指标，如有指标不合格，应重新自同批产品中抽取两倍量样品进行复检，以复检结果为准，若有不合格项，则判整批产品不合格。7 7包装、包装、运输、贮存和保质期运输、贮存和保质期7.17.1 包装包装7 7.1 1.1 1包装要求包装要求产品包装应密封，防水，避光。7 7.1 1.2 2包装规格包装规格每袋净含量为 1kg。7 7.1 1.3 3包装材料包装材料产品外包装使用的纸板箱或塑料桶、产品内包装应使用聚乙烯塑料袋或符合食品卫生要求的铝箱袋，塑料瓶(桶)及其它无毒容器。7 7.1 1.4 4净含量允差净含量允差应符合国家质量监督检验检疫总局令2005第 75 号的规定。7.27.2 运输运输产品在运输过程中需要有遮盖物，避免暴晒、雨淋及受热，不得与有毒有害及共他污染物混装混运。7.37.3 贮存贮存本产品应贮存在阴凉，干燥、通风的库房中，避免 40以上的高温，应远离有毒、易腐、易燃、易爆等危险品。7.47.4 保质期保质期在符合规定的贮运条件和包装完整、未开启封口的情况下，保质期为 12 个月。真独解（杭州）生物技术工程有限公司真独解（杭州）生物技术工程有限公司