1、48例传染性单核细胞增多症患儿EB病毒核酸定量与异型淋巴细胞实验室临床意义【摘要】目的研究传染性单核细胞增多症（以下 简称传单）患儿实验室检测中EB病毒DNA和异型淋巴细胞 的辅助诊断的临床意义。方法采取实时荧光PCR技术来定量 检测EB病毒DNA的含量拷贝数 010X103为阳性）和血液 室异型淋巴细胞计数检测比例（4%为阳性）。结果在48例 传单患者中，EB病毒DNA10X103 （阳性）40例，EB病毒 DNA4% （阳性）22例，异型淋巴细胞10X103 （阳性）40例, 异淋巴细胞4% （阳性）22例。12异淋巴细胞检测仪器、试剂及方法异型淋巴细胞检测EDTAK2抗凝全血用SYSMEX2100血流 流水线上自动推片机进行推片，自动瑞士染液染色的血片， 由经验丰富的血液工作人员两人共阅片求出的均值作为最 后异型淋巴细胞计数值（4%为阳性）。13EB病毒DNA定量检测仪器、试剂及方法使用罗氏（LightCycler480） 480PCR扩增分析仪，采用 中山大学达安基因试剂盒进行定量聚合酶链反应（PCR）检 测，方法为实时荧光PCR技术进行定量检测。质量控制：查 看阴性，阳性及标
2、准定值是否吻合决定此次检测情况。阴性 质控品：增长曲线不呈“3型曲线或Ct-30,阳性质控品： 增长曲线呈“3”型线，且强阳性质控品定量参值在 10X10620X108范围，临界阳性质控品参考值在 20X 10220X104IU/ml范围（参考值为仪器自动分析计算 出的数值）。阳性定量参考品：全部阳性，且线性相关系数 097W I r | W1。测定结果有效必须具备以上质控条件同时 满足，否则结果无效，需重做实验。检测EB病毒DNA灵敏 检测范围在102107拷贝/ml之间。14操作步骤141异型淋巴细胞检测EDTAK2抗凝全血充分混匀20次 后，用SYSMEX2100血液流水线上自动推片机进行推片，自 动瑞氏染液染色的血片，由经验丰富的血液工作人员两人共 阅血片的体尾部细胞分布均匀的部位，求出的均值作为最后 异型淋巴细胞计数值（4%为阳性）。142EB病毒DNA的定量测定1421DNA提取（标本处理区）取15 ml灭菌离心管编 号（与标本同号）。取50 ul DNA提取液于15 ml灭菌离 心管中，细心提取血清与血细胞交界处的白细胞层，尽量 吸完放入灭菌离心管中，充分吹打混匀约静置5
3、 min。振 荡器剧烈振荡混匀510 s,置（1001）笆恒温金属浴中 孵育（10 +1） min, 12000r/min 离心 5 min 备用。1422试剂准备（试剂准备区）从冰箱中取出EB病毒 DNA检测试剂，室温解冻，取02 nil样品扩增八连管，按比 例加入EB病毒DNAPCR反应液40 u 1+Taq酶3 u 1/人份至 八连管中。将加好试剂的扩增八连管放入试剂准备区和标 本处理区之间的传递窗中。加样：在标本处理区从传递窗 中取出加好试剂的八连管于生物安全柜中加样，分别依次加 入处理好的标本上清液2 U1,阴性质控品、临界阳性质控 品和强阳性质控品后，盖上密封条密闭，8000 r/min离心数 秒。将处理好的样本放入标本处理区和扩增区之间的传递 窗中，准备扩增。1423样品扩增（PCR扩增区）打开扩增区电脑及 LightCycler480主机，查看反应条件是否吻合，否则重新设 置。从传递窗中取出准备好的样品扩增管，放入 LightCycler480主机仪器扩增板内，再放进LightCycler480 主机进行扩增。2结果21异型淋巴细胞4% （阳性组）的22例，EB病毒DN
4、A 检测值10X103 （阳性组）标本40例，见表1。22结果发现在临床确诊的传染性单核细胞增多症48例 患者中，EB病毒DNA定量核酸检测阳性达833%,由于核酸 检测速度快，使用EDTAK2抗凝全血采样方便，对传染性单 核细胞增多症患者有非常高的早期诊断价值，EDTAK2抗凝全 血涂片查异型淋巴细胞对传染性单核细胞增多症诊断阳性 率也高达458% （高于文献2所述2）,此次研究发现EB病 毒DNA定量核酸检测明显高于血涂片查异型淋巴细胞对传染 性单核细胞增多症，差异有统计学意义（P 23统计方 法处理t检验。3讨论EB病毒感染引起的传染病，人员普遍易感,EB病毒（EBV） 几乎与所有鼻咽癌有关；EB病毒（EBV）对诊断传染性单核 细胞增多症至关重要；EB病毒（EBV）还同Burkitt淋巴瘤、 免疫损伤性患者的淋巴瘤有关；EB病毒（EBV）同时也可能 与何杰金氏病（Hodgkinsdisease）、慢性疲劳综合征、移植 后淋巴组织增生症等有关；检测EBV病毒的PCR （EBVDNA）, PCR荧光定量技术可从少量标本中扩增检测出所需DNA,适 用于多种不同标本的检测。为临床检测、普
5、查EBV提供快速、 准确的检测手段。本次检测的均为临床确诊的传染性单核细胞增多症患 者，传染性单核细胞增多症是由EB病毒感染引起的传染病, 人员普遍易感。EB病毒（EBV）核酸检测对诊断传染性单核 细胞增多症至关重要，本次是EDTAK2抗凝全血提白细胞层 检测核酸检测，阳性率高达833%高于文献3中所述3,而 且具有采样方便，检测时间快；可能阳性率更高，非常高的 早期诊断价值诊断价值。此次实验检测没有取鼻咽部分泌物 进行核酸检测，传染性单核细胞增多症患者大部分鼻咽部含 有EB病毒，采样更方便，可能阳性率更高。EB病毒是一种嗜淋巴细胞病毒，70%传染性单核细胞增 多症患者淋巴细胞细胞增多，而且异型淋巴细胞也明显增 多，可见异型淋巴细胞也是实验室辅助诊断传染性单核细胞 增多症的重要方法，阳性率458%高于文献4中所述4。虽 然不如核酸检测阳性率的临床意义大。但是对实验环境要求 不高，适合于各级实验室，更适合于不具备条件开展PCR核 酸检测的医院辅助诊断传染性单核细胞增多症。参考文献1陈尚明，黄海英.小儿传染性单核细胞增多症72例 临床分析南通医学院学报,2009, 29 (4)： 305-307.2陆丹，胡兴文，曾菊.儿童EB病毒感染与异型淋巴 细胞相关性分析,中国实验诊断学,2009, 13(12)： 1732-1734.3于谨铭，罗兵，李咏梅，等.EBVDNA检测在儿童EB 病毒感染中的临床意义.医学检验与临床，2012, 23 (5)： 8-10.刘莹，曹军皓，容东宁，等.传染性单核细胞增多症. 异型淋巴细胞数量与EB病毒浓度的关系实验医学杂志， 2008, 24 (20)： 3582-3583.
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