环境因素对微生物生长的影响设计实验论文.doc

物理因素对大肠杆菌生长的影响姓名： 班级： 学号：摘要：摘要：大肠杆菌分布在自然界，大多数是不致病的，主要附生在人或动物的肠道里，为正常菌群，少数的大肠杆菌具有毒性，可引起疾病影响大肠杆菌生长的环境因素有物理因素、化学因素和生物因素当环境因素发生改变，一定限度内，可引起大肠杆菌形态、生长等特征的改变当它的变化超过一定的极限时，会导致大肠杆菌的死亡本次实验为自主设计实验，我们小组主要研究的是温度、紫外线、pH 这三个物理因素对大肠杆菌生长的影响通过将菌种接种在不同 PH 值的培养基上进行培养，不同时间的紫外线照射后进行培养以及在不同的温度下进行培养，观察大肠杆菌的生长状况[1]关键词：关键词：大肠杆菌；温度；紫外线；PH 值正文：正文：1.1.环境因素对大肠杆菌的影响环境因素对大肠杆菌的影响温度通过影响蛋白质、核酸等生物大分子的结构与功能以及细胞结构入细胞膜的流动性及完整性来影响微生物的生长、繁殖和新陈代谢微生物群体生长、繁殖最快的温度为其最适生长温度；紫外线破坏及改变微生物的 DNA（脱氧核糖核酸）结构，使细菌当即死亡或不能繁殖后代；培养基中的 H+ 影响菌体细胞质膜上电荷性质，微生物吸收物质变化，影响代谢，高浓度 H+或引起菌体表而蛋白质和核酸水解以及影响酶和活性[2]。

2.2. 实验材料实验材料2.1 菌种：大肠杆菌2.2 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基2.3 试剂：蒸馏水、盐酸、氢氧化钠2.4 仪器及设备：锥形瓶、烧杯、玻璃棒、电炉、电子天平、培养皿、涂布棒、试管、酒精灯、火柴、10ml 移液管、洗耳球、微量移液管、微波灭菌机、高压灭菌锅、恒温培养箱、紫外灯、分光光度计3.3.实验方法实验方法3.1 温度对大肠杆菌的影响培养基的配置：称取 3.5g 营养琼脂培养基于 100ml 蒸馏水中，加热溶解分装至 6 支试管内，分装高度以试管高度的 1/4 为宜，灭菌备用接种：将经过高压蒸汽灭菌的试管进行冷却，然后无菌操作用微量移液器移取 0.1ml 大肠杆菌菌液（使用前振荡均匀） ，接种于 6 支试管中，震荡均匀培养：将接种大肠杆菌的试管分别置于 4℃、37℃和 42℃条件下的恒温培养箱培养，24h 后观察菌落生长情况④观察：以“-”表示不生长，并以“+” “++” “+++”表示不同生长量来记录结果3.2 紫外线对大肠杆菌的影响培养基的配置：称取 3.5g 营养琼脂培养基于锥形瓶中，加入 100ml 蒸馏水将其密封后进行高压蒸汽灭菌倒平板：将已经灭菌的营养琼脂培养基倒入无菌培养基中，倒入三个培养皿，水平放置冷却凝固，并且分别标上 2min、3min、4min。

接种：待培养皿冷却、凝固后，用微量移液管移取 0.1ml 大肠杆菌菌液（使用前震荡均匀）于一个培养皿中，并且用杀菌并冷却后的涂布棒涂布均匀④紫外线处理：紫外灯先预热 15min，将需要紫外灯照射的培养皿置于紫外灯下，打开皿盖，分别照射 2min、3min、4min，照射完毕后，盖上皿盖⑤培养：将平板倒置在 37℃的恒温培养箱中培养 24h，然后进行观察并菌落总数的计算、记录结果3.3 PH 值对大肠杆菌的影响培养基的配制：称取 1.8g 营养肉汤培养基于 100ml 蒸馏水中，加热溶解取 6 支试管，然后用移液管分别移取 10ml 培养基于每支试管中用 1mol/L 氢氧化钠溶液和 1mol/L 盐酸溶液调节每两支试管的 pH 至 3、7、11，灭菌备用接种：将经过高压蒸汽灭菌的试管进行冷却，然后无菌操作用微量移液器移取 0.1ml 大肠杆菌菌液（使用前振荡均匀） ，接种于装有 10ml 不同 pH 营养肉汤的试管中（振荡均匀） ③培养：将接种大肠杆菌的试管置于 37℃恒温摇床中培养 24h④测 OD 值：将上述试管取出，利用分光光度计测定大肠杆菌 OD600nm 值测量时用蒸馏水校正，不同 pH 的大肠杆菌菌液测量前必须摇匀，然后才能倒入比色皿中测定波长为600nm 的 OD 值。

吸光值越大，浓度越大，即大肠杆菌生长越旺）4.4.菌落计数菌落计数4.1 选取菌落数在 30 CFU～300 CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数低于 30 CFU 的平板记录具体菌落数，大于 300 CFU 可记录为多不可计每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数4.2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以 2，代表一个平板菌落数4.3 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数5.5.实验结果实验结果 表表 1 1 温度对大肠杆菌生长的影响温度对大肠杆菌生长的影响温度（温度（℃℃））4 437374242生长状况生长状况- -++++++++++注：注：“-”表示不生长， “+” “++” “+++”表示不同生长量表表 2 2 pHpH 对大肠杆菌生长的影响对大肠杆菌生长的影响pH 透光率（T％）3711182.834.688.5283.13587.7平均值82.934.888.1另：紫外线组，由于小组的疏忽，忘记把载玻片取下，该组实验失败。

6.分析与讨论结果表明温度为 4℃时，大肠杆菌几乎不生长，37℃时正常生长，42℃时最短，从这可以联想到，在人的大肠环境下，大肠杆菌能正常生长；pH=3、11 时液体培养基澄清透明，pH=7 时液体培养基非常混浊说明大肠杆菌适宜在PH=7 的条件下生长繁殖；按常理分析，紫外线分别照射 2min、3min、4min 后培养，随着照射时长的增长其生长量下降实验过程中，由于我们的粗心，在紫外杀菌后没有把载玻片拿出来，致使实验结果的不完整，是因为大家都对实验原理理解的不透彻；温度和 ph 的实验实验结果不算很明显，要改进的话，该液体培养为培养基培养或许会更好；在用分光光度计时，由于对分光光度计的不熟悉，混淆了 A 和 T 的概念，从而将吸光度测成了透光率，经查阅了解，A 为吸光度；I为入射的单色光强度；I 为透射的单色光强度；T 为物质的透射率；在整个实验过程中都应注意实验操作的规范，防止外来菌种的污染参考文献参考文献[1]罗中捷,周卓晟,郝春慧,刘红艳,黄正. 环境胁迫因子对大肠杆菌的影响[J]. 中国卫生检验杂志,2010,04:939-942.[2]刘娟娟. 离子对大肠杆菌生长的影响以及大肠杆菌生物被膜的初步研究[D].山东中医药大学,2010.。