还原糖的测定1.doc

实验七实验七 还原糖的测定还原糖的测定 （3，5-二硝基水场酸比色法） 一、目的：一、目的： 掌握还原糖定量测定的基本原理， 学习比色定糖法的基本操作，熟悉 723 型公光光度 计的使用方法 二、原理：二、原理： 各种单糖和麦芽糖是救灾原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖 在碱性条件下，还原糖与 3，5-二硝基水杨酸被共热，3，5-二硝基水场酸还原为 3-氨 基-5-硝基水杨酸（棕红色物质） ，还原糖则被氧化成糖酸及其它产物在一定范围愉，还 原糖的量与棕红色物质颜色深浅成一定比例关系，在 540nm 波长下测定棕红色物质的消光 值，查对标准曲线并计算，便可分别求出样品中还原糖的含量 三、实验材料、仪器和试剂：三、实验材料、仪器和试剂： （一）实验材料：面粉 （二）仪器： 1、25 毫升血糖管或刻度试管*9 2、大塑料离心管 3、烧杯 100 毫升1 4、容量瓶： 100 毫升1 5、恒温水浴 6、沸水浴 7、离心机 8、扭力天平 9 分光光度计 （三）试剂 1、 1 毫克/毫升葡萄糖标准液：准确称取 100 毫升分析纯还原糖（预先在 80℃烘至恒重） ， 置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到 100 毫升的容量中，以蒸馏水定容至刻 度，摇匀，冰箱中保存备用。

2、3，5-二硝基水杨酸试剂：将 6.3 克 3，5-二硝基水杨酸和 262 毫升 2mol/LNaOH 溶液加 到 500 毫升含有 185 克酒石酸钾钠的热水溶液中，再加 5 克结晶酚和 5 克亚硫酸钠，搅拌 至溶解冷却后加蒸馏水定容至 1000 毫升，贮于棕色瓶中备用 四、操作步骤：四、操作步骤： （一）制作葡萄糖标准曲线： 取 7 支具有 25 毫升刻度的刻度试管，编号，按下表所示的量，精确加入浓度为 1 毫克 /毫升的葡萄糖标准液和 3，5-二硝基水杨酸试剂0123456葡萄糖糖 标准液 （毫升）00.20.40.60.81.01.2蒸馏水 （亳升）2.01.81.61.41.21.00.83，5-二 硝基水杨 酸试剂 （毫升）1.51.51.51.51.51.51.5将各管摇匀，在沸水中加热 5 分钟，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温， 再以蒸馏水定容到 25 毫升刻度处，用橡皮塞塞住管口，颠倒混匀在 540nm 波长下，用 0 号管调零，分别读取 1~6 管的消光值以消光值为纵坐标，葡萄糖毫克数为横坐标，绘 制标准曲线管 号数量项目（二） 、样品中还原糖含量的测定： 1、样品中还原糖的提取：准确称取 3 克食用面粉，放在 100 毫升的烧杯中，先以少量蒸馏 水，搅匀，置于 50℃恒温水浴中保温 20 分钟，使还原糖浸出。

然后转入大塑料离心管中， 4000 转/分离心 5 分钟，上清全部收集到 100 毫升的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀， 作为还原糖待测液 2、显色和比色：取 2 支具有 25 毫升刻度的刻度管，编号，按下表所示的量，准确加入待 测液和试剂还原糖测定管号12还原糖待测液（毫升）1．51．5蒸馏水（毫升）0．50．53，5-二硝基水杨酸试剂（毫升）1．5加完试剂后，其余操作均与制作葡萄糖标准曲线时相同，测定各管消光值 五、结果与计算：五、结果与计算： 以管（1） 、 （2）的消光值平均值，分别在标准曲线上查出相应的还原糖毫克数按以 下式计算出样品中还原糖的百分含量提取液总体积 还原糖%= 查曲线所得还原糖毫克数 测定时取用体积 100样品毫克数 六、附注六、附注： 1、离心比过滤易得清液 2、标准曲线线作与样品含糖量测定应同时进行，一起显色和比色管 号数量项目。