《革兰氏染色法》PPT课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,,单击此处编辑母版文本样式,,第二级,,第三级,,第四级,,第五级,,*,*,*,革兰氏染色法,,,,,河南城建学院环境科学与工程实验中心,,环境生物技术实验室,,一 目的要求：,,1、学习并初步掌握革兰氏染色法2、了解革兰氏染色法的原理极其在细菌分类,,鉴定中的重要性二 基本原理：,,革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家Christain Gran 创立的，基本步骤是：,,1、初染：结晶紫染色,,2、媒染：碘液媒染,,3、脱色：乙醇脱色,,4、复染：番红复染,,经此法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌；细胞中初染剂被脱色剂洗脱而染上复染剂的颜色（红色）的细菌为革兰氏阴性菌Gram stain of Gram -,Gram stain of Gram +,实验原理：,细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它们,细胞壁,的成分和结构不同而造成的初染后，所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫—碘的复合物，增强染料与细菌的结合力当用脱色剂处理时，革兰氏阳性菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低，用乙醇脱色时细胞壁脱水，使肽聚糖层的网状结构孔经缩小，透性降低，从而使结晶紫—碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。

革兰氏阴性菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂质含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫—碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色Structure of a Gram-Negative Cell Wall Structure of a Gram-Positive Cell Wall,,三、器材：,,大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，革兰氏染色液，,,载玻片，显微镜等,,四、操作步骤：,,1、涂片：将大肠杆菌（24h）和金黄色葡萄球菌 （24h）分别涂片、干燥、固定2、染色：,,（1）初染：加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟，水洗,,（2）媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖一分钟，水洗,,（3）脱色：将水甩净，并衬以白背景，用95%乙醇滴洗至刚刚无紫色为止，约20—30秒，立即用水冲净乙醇,,（4）复染：用番红液染1--2分钟，水洗,3、镜检：干燥后，油镜观察以分散开的细菌颜色为准，革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色4、混合制片观察：一载玻片上两种菌混合制片，对比观察步骤1：涂片,,步骤2：干燥,,步骤四 染色,步骤三 固定,crystal violet stain,,wash with water,,结晶紫染色 水洗,Stain with,gram's iodine solution,,,碘液复染,Decolorize by adding,95% alcohol,,,95%酒精脱色,Counterstain with Safranin,,,沙黄复染,Results of stain,,染色结果,五 注意事项,1）注意涂片不宜过。

2）火焰固定温度要适宜3）注意控制好脱色程度六、实验报告：,1、结果：列表简述2株细菌的染色观察结果（形状、颜色、革兰氏染色反应） 2、思考题： 1）作革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚？其染色成败的关键步骤是什么？ 2）当你对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样能确证你的染色技术操作正确，结果可靠？3）造成革兰氏染色结果不正确（假阴性或假阳性）的主要原因有哪些？,。