实验二 丹皮酚微囊的制备及含量测定.doc
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实验二 丹皮酚微囊的制备及含量测定【目的要求】1. 学习了解微囊剂型2. 掌握用复凝聚法，以壳聚糖-海藻酸钠为囊材，制备丹皮酚微囊3. 掌握用紫外分光光度法测定微囊的包封率、载药量实验材料】（一）仪器：1. 万分之一电子分析天平；2. 磁力搅拌器；3. 752 型紫外可见分光光度计；4. 恒温水浴锅；5. 其他：布氏漏斗；移液管（5 mL×1，1 mL×1） ；容量瓶（2 mL×1，10 mL×5，1000 mL×2） ；一次性注射器（2.5 mL×1，10 mL×2） ，针头（10 mL 注射器的 7 号针头） ；锥形瓶（100 mL×5） ；烧杯(100 mL×2，250 mL×2)；量筒（50 mL×1） ；玻璃棒；pH 试纸；洗耳球；温度计二）试剂：1. 1%海藻酸钠；2. 0.2%壳聚糖；3. 1%氯化钙；4. 1%的醋酸溶液；5. 无水乙醇（分析纯） ；6. 甲醛（分析纯） ；7. 1 mol/L NaOH，0.2 mol/L NaOH；8. 蒸馏水三）药物：丹皮酚【实验原理】海藻酸钠和壳聚糖是两种分别荷负电与正电的高分子材料，他们均无毒、生物相容性好、可生物降解的天然高分子材料，两者均因其良好的成膜及成型性而被广泛应用于药物制剂、组织工程、临床治疗、细胞培养、食品加工等。
壳聚糖-海藻酸钠制备微囊的原理主要有两个反应：1. 海藻酸钠滴入多价阳离子溶液（如钙离子）时具有瞬时凝胶化的特性反应式可以写作（以钙离子为例）：NaALG（海藻酸钠）+Ca2+CaALG（海藻酸钙凝胶）+Na+2. 壳聚糖是一种阳离子聚电解质多糖，其分子链上具有大量的伯氨基；海藻酸钠是一种阴离子聚电解质多糖，其分子链上有大量的羧基，所以海藻酸钠和壳聚糖可以通过正负电荷吸引形成聚电解质膜，其反应如下：标准曲线的绘制：精密称取丹皮酚 1.6 mg 置 10 mL 容量瓶，加适量无水乙醇溶解，超声 0.5 h，静置冷却，用无水乙醇定容精密吸取上述溶液 5 mL 置 50 mL 容量瓶中，加无水乙醇定容至刻度，摇匀分别精密吸取 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0 mL 置 10 mL 容量瓶中，加入无水乙醇定容至刻度，摇匀配成质量浓度分别为 1.6, 3.2, 4.8, 6.4, 8.0 mg·L-1的标准溶液，于 274 nm 处测定吸光度 A，以吸光度 A 与对应浓度 C 线性回归制作标准曲线实验方法】海藻酸钠、氯化钙、壳聚糖的浓度是影响制备微囊的三个主要因素；现以海藻酸钠 1%、氯化钙 1%、壳聚糖 0.2%的处方制备丹皮酚微囊：1. 精密称取一定量壳聚糖，置于 1000 mL 容量瓶中，用 1%醋酸溶液定容，配制 0.2%的壳聚糖醋酸溶液。
2. 精密称取一定量氯化钙，置于 1000 mL 容量瓶中，并用蒸馏水定容，配制 1%氯化钙溶液3. 精密称取 0.5 g 丹皮酚，置于 2 mL 容量瓶中，无水乙醇定容，超声溶解 0.5 h，至完全溶解，冷却定容4. 精确量取 20 mL 蒸馏水置于 100 mL 烧杯中，加热升温至 6070 ℃；将精密称量的海藻酸钠粉末磁力搅拌（200 r/min）至海藻酸钠完全溶解，海藻酸钠溶液呈澄清无气泡×100%=5. 将海藻酸钠溶液冷却至 40 ℃，在磁力搅拌机上边搅拌（200 r/min）边缓慢用注射器加入 0.5 g 丹皮酚，加入完全后，继续搅拌 30 min，至丹皮酚海藻酸钠混合溶液乳化，得到乳白色的丹皮酚海藻酸钠乳化液，称量记重 M16. 量取 50 mL 氯化钙溶液置于 100 mL 锥形瓶中；用 10 mL 注射器吸取适量步骤 5 中制得的丹皮酚海藻酸钠乳液，用 7 号针头将乳液以每分钟 20 滴速度，针头距液面 30 cm，缓慢滴入一定浓度的氯化钙溶液中，期间维持丹皮酚海藻酸钠乳液 40 ℃微囊全部沉下去，得淡黄色微囊小球后，抽滤；滴制完成后烧杯和转子量记重 M27. 量取 20 mL 壳聚糖溶液置于 100 mL 烧杯中，用 1 mol/L 的 NaOH 调节壳聚糖溶液pH=6.0，将微囊加到壳聚糖溶液中，静置反应 1 h，得白色微囊，抽滤。
8. 量取 30%甲醛溶液 20 mL 置于 100 mL 烧杯中，将抽滤得到的微囊加入烧杯中静置固化1.5 h，抽滤，得到白色微囊水洗 3 次，醇洗 3 次，干燥 48 h，即得9. 包封率和载药量的测定：精密称取丹皮酚微囊 0.060 g 于研钵中，加入无水乙醇，研磨破坏微囊，完全转移至 10 mL 容量瓶中，超声 30 min 完全破坏微囊，冷却后用无水乙醇定容；稀释 5000 倍并于 274 nm 处测定吸光度 A实验结果】包封率=微囊中含药量/投药量×100%微囊中丹皮酚含量(测)×理论总重(20.7 g)×制得的微囊总重(测)丹皮酚投药量(0.5 g)×实际总重(M1-M2)×所称微囊质量(0.060 g)载药量=微囊中含药量/微囊总质量×100%。
