第十章DNA的生物合成（复制）课件.ppt

1（二）复制的延长（二）复制的延长: :领头链连续复制，随领头链连续复制，随 从链不连续复制从链不连续复制复复制制的的延延长长指指在在DNA-DNA-polpol催催化化下下，dNTPdNTP以以dNMPdNMP的的方方式式逐逐个个加加入入引引物物或或延延长长中中的的子子链链上上，其化学本质是磷酸二酯键的不断生成其化学本质是磷酸二酯键的不断生成 DNADNA生物合成过程生物合成过程2 5 5 3 35 5dATPdGTPdTTPdCTPdTTPdGTPdATPdCTPOH 33 3DNA-polDNA生物合成过程领头链的合成领头链的合成: :领头链的子链沿着领头链的子链沿着5 3 方向可以连续地延方向可以连续地延长长随从链的合成随从链的合成复复制制过过程程简简图图复制过程动画*8原核生物基因是环状原核生物基因是环状DNADNA，双向复制的复制，双向复制的复制片段在复制的终止点片段在复制的终止点( (terter) )处汇合oriter E.coli8232 ori terSV40500（三）（三）复制复制的终止的终止95 5 5 RNA酶酶OHP5 DNA-pol dNTP5 5 PATP ADP+Pi5 5 DNA连接酶连接酶v随从链上不连续性片段的连接随从链上不连续性片段的连接10二、真核生物的二、真核生物的DNADNA生物合成生物合成 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子复真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子复制。

复制有时序性，即复制子以分组方式激活而不制复制有时序性，即复制子以分组方式激活而不是同步起动是同步起动 复制的起始需要复制的起始需要DNA-pol（引物酶活性）和（引物酶活性）和pol（解螺旋酶活性）参与还需拓扑酶和复制因（解螺旋酶活性）参与还需拓扑酶和复制因子子(replication factor, RF) 增殖细胞核抗原增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen, PCNA)在复制起始和延长中起关键作用在复制起始和延长中起关键作用一）复制的起始与原核基本相似（一）复制的起始与原核基本相似11（二）真核生物复制的延长发生（二）真核生物复制的延长发生DNA聚合酶聚合酶/转换转换DNA-pol 和和pol 分分别别兼兼有有解解螺螺旋旋酶酶和和引引物物酶酶活活性性在在复复制制叉叉及及引引物物生生成成后后，DNA-pol 通通过过PCNA的的协协同同作作用用，逐逐步步取取代代pol ，在在RNA引引物物的的3 -OH基基础础上上连连续续合合成成领领头头链链随随从从链链引引物物也也由由pol 催催化化合合成成然然后后由由PCNA协协同同，pol 置置换换pol ，继继续续合合成成DNA子链。

子链 12染色体染色体DNADNA呈线状，复制在末端停止呈线状，复制在末端停止复制中岡崎片段的连接，复制子之间的连接复制中岡崎片段的连接，复制子之间的连接染色体两端染色体两端DNADNA子链上最后复制的子链上最后复制的RNARNA引物，引物，去除后留下空隙去除后留下空隙三）复制的终止（三）复制的终止DNADNA生物合成过程生物合成过程13DNADNA生物合成过程生物合成过程5 3 3 5 5 3 3 5 +5 3 3 3 3 5 5 5 14n线性线性DNA复复制的末端制的末端 15端粒端粒(telomere)指真核生物染色体线性指真核生物染色体线性DNA分子末端的结构分子末端的结构功能功能 维持染色体的稳定性维持染色体的稳定性 维持维持DNA复制的完整性复制的完整性 端粒端粒16端粒酶端粒酶(telomerase)(telomerase)端粒酶端粒酶RNA (human telomerase RNA, RNA (human telomerase RNA, hTRhTR) )端粒酶协同蛋白端粒酶协同蛋白(human telomerase associated protein 1, (human telomerase associated protein 1, hTP1)hTP1)端粒酶逆转录酶端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase, (human telomerase reverse transcriptase, hTRThTRT) ) 组成组成17端粒酶的催化延长作用端粒酶的催化延长作用爬行模型爬行模型DNADNA聚合酶复制子链聚合酶复制子链进一步加工进一步加工19逆转录和其他复制方式逆转录和其他复制方式Reverse Transcription and Other DNA Replication Ways第四节第四节20双双链链DNA是是大大多多数数生生物物的的遗遗传传物物质质。

某某些些病病毒毒的的遗遗传传物物质质是是RNA少少数数低低等等生生物物如如M13噬噬菌菌体体，它它的的感感染染型型只只含含单单链链DNA原原核核生生物物的的质质粒粒，真真核核生生物物的的线线粒粒体体DNA，都都是是染染色色体体外外存存在在的的DNA这这些些非非染染色色体体基基因因组组，采采用特殊的方式进行复制用特殊的方式进行复制21一、逆转录一、逆转录(reverse transcription) RNA指导下的指导下的DNA合成过程合成过程, 催化此反应催化此反应 的酶为逆转录酶的酶为逆转录酶逆转录逆转录22 逆转录酶具有三种酶活性逆转录酶具有三种酶活性 1. RNA指导的指导的DNA合成合成2. 35和和53RNA外切酶活性，可水解外切酶活性，可水解RNA 35RNA外切酶活性又称外切酶活性又称RNaseH活性，能特活性，能特 异水解异水解 RNA-DNA杂交体上的杂交体上的RNA3. DNA指导的指导的DNA合成合成逆转录酶逆转录酶(reverse transcriptase)(reverse transcriptase) 逆转录逆转录23逆转录过程逆转录过程逆转录酶逆转录酶RNase H逆转录酶逆转录酶RNARNA-DNA 杂化双杂化双链链单链单链 DNA双链双链 DNA逆转录逆转录24(HIV)逆转录25逆转录酶逆转录酶 A AA A T T T TAAAASISI核酸酶核酸酶 DNA聚合酶聚合酶碱水解碱水解 T T T T分子生物学研究可应用逆转录分子生物学研究可应用逆转录酶，作为获取基因工程目的基因的酶，作为获取基因工程目的基因的重要方法之一，此法称为重要方法之一，此法称为cDNA法。

法 以以mRNA为模板，经逆转为模板，经逆转录合成的与录合成的与mRNA碱基序列互碱基序列互补的补的DNA链 试管内试管内合成合成cDNAcDNAcDNA complementary DNA cDNA合成*26二、逆转录研究的意义二、逆转录研究的意义 逆转录酶和逆转录现象，是分子生物学研究中逆转录酶和逆转录现象，是分子生物学研究中的重大发现的重大发现 逆转录现象说明：至少在某些生物，逆转录现象说明：至少在某些生物，RNA同样同样兼有遗传信息传代与表达功能兼有遗传信息传代与表达功能对逆转录病毒的研究，拓宽了对逆转录病毒的研究，拓宽了20世纪初已注意世纪初已注意到的病毒致癌理论到的病毒致癌理论 逆转录逆转录27 滚环复制滚环复制(rolling circle replication)三、滚环复制和三、滚环复制和D D环复制环复制 是某些低等生物的复制形式，如是某些低等生物的复制形式，如 X174和和M13噬菌体等噬菌体等3 -OH5 -P5 5 5 3 3 3 3 5滚环复制滚环复制5 5 3 3 5 29dNTPDNA-pol D环复制环复制(D-loop replication) 是线粒体是线粒体DNA (mitochondrial DNA，mtDNA)的复制的复制形式。

形式 30 D-环环复复制制时时需需合合成成引引物物mtDNA为为双双链链，第第一一个个引引物物以以内内环环为为模模板板延延伸伸至至第第二二个个复复制制起起始始点点时时，又又合合成成另另一一个个反反向向引引物物，以以外外环环为为模模板板进进行行反反向向的的延延伸伸最最后后完完成成两两个个双双链链环环状状DNA的复制复制中呈字母的复制复制中呈字母D形状而得名形状而得名 D环环复复制制的的特特点点是是复复制制起起始始点点不不在在双双链链DNA同一位点，内、外环复制有时序差别同一位点，内、外环复制有时序差别31DNA损伤（突变）与修复损伤（突变）与修复DNA Damage (Mutation) and Repair第五节第五节32DNA突变具体指个别突变具体指个别dNMP残基以至片段残基以至片段DNA在在构成、复制或表型功能的异常变化，也称为构成、复制或表型功能的异常变化，也称为DNA损损伤伤(DNA damage)从分子水平来看，突变就是从分子水平来看，突变就是DNA分子上碱基的改分子上碱基的改变DNADNA损伤损伤33一、突变的意义一、突变的意义（一）突变是进化、分化的分子基础（一）突变是进化、分化的分子基础（二（二）突变导致基因型改变突变导致基因型改变（三（三）突变导致死亡突变导致死亡（四）突变是某些疾病的发病基础（四）突变是某些疾病的发病基础 DNADNA损伤损伤34二、多种化学或物理因素可诱发突变二、多种化学或物理因素可诱发突变大大量量的的突突变变属属于于自自发发突突变变，发发生生频频率率只只不不过过在在10-9左左右右。

但但由由于于生生物物基基因因组组庞庞大大，细细胞胞繁繁殖殖速速度度快快，因此它的作用是不可低估的因此它的作用是不可低估的实实验验室室用用来来诱诱发发突突变变，也也是是生生活活环环境境中中导导致致突突变变的因素，主要有物理和化学因素的因素，主要有物理和化学因素 35 物理因素物理因素 : :紫外线紫外线(ultra violet, UV)(ultra violet, UV)、各种辐射、各种辐射 UV36化学因素化学因素37三、突变的分子改变类型三、突变的分子改变类型错配错配 (mismatch)(mismatch)缺失缺失 (deletion)(deletion)插入插入 (insertion)(insertion)重排重排 (rearrangement)(rearrangement)框移框移(frame-shift) 38DNA分子上的碱基错配称分子上的碱基错配称点突变点突变(point mutation)自发突变和不少化学诱变都能引起自发突变和不少化学诱变都能引起DNA上某一碱基上某一碱基的置换点突变发生在基因的编码区，可导致氨基酸改变点突变发生在基因的编码区，可导致氨基酸改变 （一）错配可导致编码氨基酸的改变（一）错配可导致编码氨基酸的改变39镰形红细胞贫血病人镰形红细胞贫血病人Hb (HbS) 亚基亚基N-val his leu thr pro val glu C肽链肽链CAC GTG基因基因正常成人正常成人Hb (HbA)亚基亚基N-val his leu thr pro glu glu C肽链肽链CTC GAG基因基因n镰形红细胞贫血病人镰形红细胞贫血病人40HbA：N Val-His-Leu-Thr-Pro-Glu-Glu-LysHbS： N Val-His-Leu-Thr-Pro-Val-Glu-Lys 正常红细胞正常红细胞 镰状红细胞贫血症镰状红细胞贫血症41（二（二）缺失缺失、插入插入和框移和框移缺失：缺失：一个碱基或一段核苷酸链从一个碱基或一段核苷酸链从DNA大分子上消失大分子上消失。

插入：插入：原来没有的一个碱基或一段核苷酸链插入到原来没有的一个碱基或一段核苷酸链插入到DNA大分子中间大分子中间框移突变框移突变是指三联体密码的阅读方式改变，造是指三联体密码的阅读方式改变，造成蛋白质氨基酸排列顺序发生改变成蛋白质氨基酸排列顺序发生改变 缺失或插入都可导致缺失或插入都可导致框移。