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甘草药材TLCS指纹图谱的研究曾远堂 何远亮 陈颖珠林丽琼深圳职业技术学院生物应用工程系现代制药专业指导教师：崔淑芬摘要目的研究甘草药材的薄层扫描指纹图谱(TLCS-FP),为科学评价及有效控制其质量提供可靠 方法方法 采用1%蛍氧化钠浸渍硅胶GF254预制板(Merck),酷酸乙酯-甲酸-冰酷酸-水(15： 1： 1： 2) 为展开剂，254nm紫外吸收扫描结果14批廿草药材样品得到的TLCS指纹图谱有6个共有峰，聚类分析 结果正品廿草药材有较好的相似度；三维图谱可对不同产地的甘草药材质量进行直观比较结论 该 TLCS-FP可用于甘草的真伪鉴别和质量评价关键词||•草；薄层扫描法；指纹图谱Study on TLCS fingerprint of glycyrrhiza ural ens is FischZen gyuantang He yuanliang Chen yingzhu Lin liqiongDept, of Biological Applied Eng・，Shenzhen Polytechnic, Shenzhen 518055Abstract Objective: To establish a sensitive and specific TLCS method for control ling the quality of glycyrrhiza uralensis Fisch.. Met hod： The characteristic TLCS Chromatogram was obtained by using pre-coated 20X10cm silica gel 6OF254 plate (Merck) modified by 1% sodium hydroxide, ethyl acetate-formic acid-ethanoic acid-water(15:1:1:2) as the solvent system, and quantitative analysis was carried out using UV absorptive scanning at 254nm. ResuIt： The TLCS-FP of glycyrrhiza uralensis Fisch., showing 6 characteristic peaks, was established by 14 lots of glycyrrhiza uralensis Fisch. . By cluster analysis and similarity calculation, the similarity of the positive samples was very high. 3D graph was selected to compare the results. Conclusion: This method can be used to identify and evaluate the quality of glycyrrhiza uralensis Fisch.Key words Glycyrrhiza uralensis Fisch: Thin layer chromatography seanning method ； Fingerprint Spectrum前言近年来，人们在“冋归自然”的热潮中，重新引起对传统药物的极大重视。

中药是我国人民在数千年 治疗疾病过程中积累起来的宝贵财富，而中药生产和质量的规范化和现代化是走向世界的重要前提经过多年來的植物化学和药理药效研究，其中特别是近儿十年來对中药药效的深入研究，人们越來越 认识到中药的药效不是来自单一的活性化学成分，而是來自多种活性成分之间的“协同作用”，甚至是与某 些“非活性成分”的协同效应或“生克作用”因此，任何单一的活性化学成分或指标成分都难以评价中药的真伪和优劣利用现代先进的分析技术来分析药材的整体特性，以更准确鉴别不同中药及识别中药本身 的真伪和优劣，成为中药指纹图谱分析的基础原动力⑴建立于中药材成分系统研究结果Z上的物质群指纹图谱，是现阶段可以全面反映中药材内在质暈的一 个有效手段中药材药效的发挥，既然不能为一个或一种化学成分所体现，那么，建立全面反映所含成分 的指纹图谱，将更加有效地体现中药材成分的复杂性，从而更好地评价中药材的内在质量，中药材物质群 指纹图谱也必将成为中药材质量评价的发展趋势中药材指纹图谱的建立，其冃的是全面反映中药材所含 内在化学成分的种类和数暈，进而反映中药的质量，尤其在现阶段中药的有效成分绝大多数没有明确，采 用中药材物质群指纹图谱的方式，将有效地表征中药材质量；同时指纹图谱也为国际社会所认可，有利于 中药材及其产品进入国际市场⑵。

中药材物质群指纹图谱系指中药材经适当地处理以后，采用一定的分析手段（主要是色谱或光谱方法 等），得到的能够反映该中药材特性的共有峰的图谱准确地说，中药指纹图谱是不同于我们常规意义的“指 纹”含义的，恰恰相反，中药指纹图谱赖以鉴别中药的药材真伪和质量优劣所要强调的却是作为药用植物 物种的“共有特征性”对于中药指纹图谱有如下定义：中药指纹图谱是一种综合的，可量化的鉴定手段借以鉴别真伪，评价原料药材、半成品和成品质量 均一性和稳定性其本质属性是“多成分整体性”和“模糊性”这一定义说明中药指纹图谱是一种综合的、整体的鉴定手段，其功用范围在于鉴别真伪，并还可以评 价药材的均一性和稳定性［3］从其综合和整体性能看，它可准确且又可量化地对药材进行真伪鉴别和质量 评价，而从细节上看，中药指纹图谱又是很模糊的，尤其是因为生药有“道地性”和“采集时间因素”的 实际情况，人们很难给出一个对所有药品都适用的共有峰和非共有峰的比例，也更不可能像西药那样要求 一一对应为此，建立的中药材物质群指纹图谱应具有整体性（均一性）、特征性、模糊性和稳定性中药材物质群指纹图谱突破传统的线性思维，根据指纹图谱的模糊属性，着眼于宏观规律性的特征分 析，在药理、药效被确认的前提下，凭借其指纹图谱，既可确认中药材的真伪、优劣，同时又能判断质量 的稳定与否［2］。

因此，中药材物质群指纹图谱己成为冃前控制中药质量最有效的方法中药业发展到今天，中药指纹图谱质控技术已是牵动行业全面进步的关键技术其应用研究，对保证 中药功效，提高中药工业整体水平，带动中药农业现代化，推进中药走向世界，具有非常重要的现实意义薄层扫描法（Thin-layer chromatography-Scanning method,缩写TLCS ）是以薄层色谱法为基础发 展起来的薄层色谱组分原位分析方法及薄层色谱的记录方法薄层色谱的实验成本低、流动相的更换与选 择方便、薄层扫描仪的使用效率高另外，它提供色彩丰富、直观易认、印象深刻的可见光或荧光色谱图 像，在同一薄层板上同时比佼可多达1 8个样品的指纹图谱，尤其适合日常分析检验和现场检验选择薄 层扫描法对中药进行指纹图谱质量控制具有广阔的应用前景中药甘草为豆科植物甘草（GlycyrrhizB uwlensisFlsch.）、胀果甘草（Glycyrrh iza inf lata Bat.） 或光果甘草｛Glycyrrhiza glabra L.）的干燥根及根茎其中甘草是中药甘草的主要品种甘草为重要的常 用中药，素有“国老”之称，具止咳化痰、解毒清热及调和诸药等作用，俗称“十方九草”，在临床上有大 量的应用。

甘草主要含三话类和黃酮类成分旷叫据报道有100多种黄酮类化合物、60多种三祜类化合物 以及香豆素类等多种成分现有的质量标准（中华人民共和国药典2000版）是以有效成分Z — 一一三菇类化合物甘草酸的鉴别（TLC法）和甘草酸的含量测定（HPLC法）作为质控指标，大量的质控研究也都是 I詞绕甘草酸的含量测定方法而进行"切国内外认同的可以全面反映中药内在质量的指纹图谱质控技术在甘 草的应用则未见报道本文对薄层扫描法（Thin layer chromatography Scanning method,缩写TLCS）在甘草药材指纹图谱 中的应用进行了初步研究结合化学计量学中的聚类分析和相似度判断等方法，对甘草药材进行真伪鉴别 和质量控制1仪器与试药CAMAG Linomat 5半自动点样仪；CAMAG Scanner3薄层色谱扫描仪；硅胶GF254预制板10X 20cm （Merck,德国）；双槽展开缸；Grant XB14超声波清洗机对照品：甘草酸单钱盐（中国亿利资源集团公司李秉经理提供，纯度75%）；甘草背（由厦门大学傅博 强博士制备，纯度96.4%）甘草样品来源见表1,全部样品由中国医学科学院药用植物研究所林寿全教授鉴定为甘草Glycyrrhizauralensis Fisch.的干燥根；实验所用溶剂均为分析纯，水为超纯水。

表1甘草样品来源Tab. 1 Source of G.. uralensis样品编号种植方式采收时间产地1人工2001年8月新疆哈密2人工2001年8月新疆新源3人工2001年8月新疆布尔津4野生2001年8月新疆布尔津5人工2001年8月新疆和静6野生2001年8月新疆和静7人工2000年9月河北承徳8人工2000年9月河北石家庄9野生2002年8月照龙江安达10人工2000年8月吉林白城11野生2000年8月吉林大女12人工1998年8月内蒙宝山13人工1998年8月内蒙敖汉旗14野生2002年9月内蒙额济纳旗2 方法2.1溶液制备2. 1. 1供试品溶液的制备 精密称取甘草药材粉末（过60目筛）l.OOg,加无水乙醯60ml,置具塞三角瓶 中，超声处理30min,滤过药渣加甲醇60ml超声提取60min,滤过，滤液蒸干残渣加水40ml溶解，用 水饱和正丁醇提取3次，每次20mlo合并正丁醇提取液，用水洗涤2次，置水浴上蒸干残渣精密加入甲 醇2. 0ml使溶解，定容0.45‘n滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液2. 1.2对照品溶液的制备 精密称取对照品甘草酸单钱盐4. lOmg、甘草7. 70mg，精密加入甲醇2.0ml, 超声处理lOmin,作为对照品溶液。

2.2薄层色谱实验条件2. 2. 1层析条件 每个样品用CAMAG Linomat 5半自动点样仪带状点样3 y 1于硅胶G F 2 5 4预制板 （1%氢氧化钠预处理）上，对照品分别点In 1、2卩1和3u 1点样后的薄层板于P2O5干燥器内抽真空 后放置30min,即可取出薄层板放入一个槽中已有展开剂的双槽展开缸中展开剂组成：醋酸乙酯-甲酸- 冰醋酸-水（15： 1： 1： 2）,上行展开9cm取出薄层板，晾干2.2.2扫描条件D2&W灯，254nm单波长吸收扫描，Wincats软件自动进行数据处理2.3方法学考察2.3. 1精密度与重现性取3号样品，按供试品溶液制备方法制备供试品，同板相同点样6次，检测指纹图谱，结果表明，各 色谱峰的相对比移值的RSD均低于1. 0%,单峰高大于5%总峰高的色谱峰的相对峰高的RSD为0. 6%~1. 4%取4号样品5份，按供试品溶液制备方法制备供试品，检测指纹图谱结果表明，各色谱峰的相对比 移值的RSD均低于1. 0%,单峰高大于5%总峰高的色谱峰的相对峰高的RSD为3. 8%~ 5. 1%2. 3. 2 稳定性取3号供试品溶液，分别在0, 6, 24和48h点样检测指纹图谱。