文库鉴定方法(酵母文库筛选)-总结.docx

文库鉴定方法1、质粒的转化a. 取200卩1感受态宿主菌（DH-5a）,放置冰上融化；b. 加入1卩1质粒，轻轻混匀后置于冰上30min；c. 42°C水浴热休克90sec，迅速放入冰上2min；d. 加入300卩1 SOC培养基（不含抗生素），置于37C摇床，转速200rpm,复苏45min；e. 菌液分别稀释100倍，10000倍涂布于15cm培养皿上（Apr-IPTG/x-gal LB固体 培养基），37C过夜2、克隆鉴定：a、挑克隆，37°C，200rpm培养过夜，挑克隆摇菌抽质粒作为PCR模板在 PCR 管中依次加入以下试剂，混匀Reaction Componentper rxnddH O219.5 卩110xPCR Buffer2.5 m50xdNTP Mix0.5 mT7SP0.5g13'AD0.5g1rTag0.5g1PCR模板lylTotal Volume(“l)25 ylb、 轻拍混匀各组分，稍稍离心后放到PCR仪c、 按下面程序开始PCR：94C 3min36 cycles：•94C 30sec•55C 30sec•72C 1min72C5mind、从各管中分别取5ul电泳，检测To sequence inserts in entry clones derived from BP recombination with pDONR1'222, we recommend using the following sequencing primers. Refer to the following page for the location of the primer binding sites.Forward primer (proximal to attLl)M13 Forward (-20): 5'・GTAAAACGACGGCCAG3Reverse primer (proximal to nffL2)M13 Reverse: 5'-CAGGAAACAGCTATGAC-3'次级文库鉴定引物序列：T7 Sequencing Primer5'-TAATACGACTCACTATAGGGC3'3' AD Sequencing Primer5'-AGATGGTGCACGATGCACAG-3'引物序列:pGADT7 -F (T7) pGADT7-R(ADR)taatacgactcactatagggcgaGCGCCGCCATGGTGAACTTGCGGGGTTTTTCAGTATCTACGATT。