醋酸氯己定、葡萄糖酸氯己定、盐酸氯己定测定方法.doc

附录 A（资料性附录）醋酸氯己定、葡萄糖酸氯己定、盐酸氯己定测定方法A.1 方法一：高效液相色谱法A.1.1 适用范围适用于含醋酸氯己定、葡萄糖酸氯己定、盐酸氯己定的单方和复方消毒剂A.1.2 原理样品经流动相（0.02 mol/L 磷酸二氢钾溶液pH=2.5 +乙腈=65+35）超声波提取，采用高效液相色谱-二极管阵列检测器测定，峰面积外标法定量A.1.3 仪器A.1.3.1 高效液相色谱仪，具二极管阵列检测器A.1.3.2 电子天平，感量为 0.1 mgA.1.3.3 超声波清洗器A.1.4 试剂除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯 ，实验用水为GB/T 6682规定的一级水A.1.4.1 醋酸氯己定（C22H30Cl2Ni0?2C2H4O2，CASt： 56-95-1 ）标准品A.1.4.2 磷酸二氢钾（KHPO4A.1.4.3 85% 磷酸（HPO4A.1.4.4 乙腈（CHCN :色谱纯A.1.5 分析步骤A.1.5.1 流动相、提取液的制备称取2.7 g磷酸二氢钾，放入1000 mL量筒中，加入约950 mL水溶解后，加入1.5 mL 85% 磷酸，然后用水定容至1000 mL,混匀，得到流动相 A相 （pH=2.5） , B相为乙腈。

量取流动相A相650 mL,加乙腈350 mL,混合均匀，得到提取液A.1.5.2 标准溶液的制备精密称取醋酸氯己定标准品 20 mg，用流动相稀释至50 mL,得到400 mg/L标准溶液A.1.5.3 标准曲线的制备将标准溶液用流动相稀释成 10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、80 mg/L、100 mg/L、200 mg/L的标准系列，10卩L进样测定A.1.5.4 色谱参考条件色谱柱：C18柱 （4.6 mnK 250 mm,5 卩 m）;流动相：A相 + B相相 = 65+35;流速：1.0 mL/min ; 进样量:10卩L;柱温：30 C；波长扫描200 nm〜400 nm；测定波长：260 nm ;以保留时间 和紫外光谱图谱定性，以峰面积外标法定量A.1.5.5 样品测定称取或量取样品适量于 50 mL容量瓶中，加提取液40 mL超声波提取20 min，定容至50mL, 过0.45卩m滤膜后，进样测定色谱图见图 A.1A.1.6 结果计算A.1 ）A.1 ）g/kg 或 g/L ）;单位为毫克每升（mg/L）;1.43520.9246根据标准曲线，计算样品中醋酸氯己定含量，计算公式见式（PxvX M 1000式中：X――样品中醋酸氯己定的含量，单位为克每千克或克每升（ P ――由标准曲线得到样品溶液的醋酸氯己定的质量浓度，V——定容体积，单位为毫升（mL ; M 样品量，克或毫升（g或mL。

注：葡萄糖酸氯己定含量测定可以用醋酸氯己定做标准品，并将结果乘以 盐酸氯己定含量测定可以用醋酸氯己定做标准品，并将结果乘以A.1.7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%A.2 方法二：滴定法（本方法依据《中华人民共和国药典》中醋酸氯己定的测定方法 ）A.2.1 适用范围适用于含醋酸氯己定的单方消毒剂A.2.2 原理样品用丙酮和冰醋酸溶解， 加甲基橙饱和丙酮溶液， 用高氯酸滴定液滴定， 甲基橙指示液显橙色时停止滴定，通过高氯酸滴定液使用量，计算醋酸氯己定含量A.2.3 仪器A.2.3.1 电子天平，感量为 0.1 mgA.2.4 试剂除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯 ，实验用水为GB/T 6682规定的一级水A.2.4.1 高氯酸（CIHQ）标准滴定溶液（0.1mol/L ）A.2.4.2 丙酮（CHCOCH冰醋酸（CHCOOH甲基橙（SHuNNaOS）样品测定精密称取或量取样品适量，加丙酮 30 mL与冰醋酸2 mL ,振摇使溶解后，加甲基橙的饱 和丙酮溶液0.5 mL〜1 mL,用高氯酸滴定液（0.1mol/L ）滴定至溶液显橙色，并将滴定的结 果用空白试验校正。

每 1 mL高氯酸滴定液（0.1mol/L ）相当于 31.28mg的G2H0CI2NW 2C2HkQA.2.6 结果计算样品中醋酸氯己定含量，计算公式见式（ A.2 ）A.2)C (V -V0) 31.28M式中：X――样品中醋酸氯己定的含量，单位为克每千克或克每升（ g/kg或g/L ）； C——标准滴定溶液的摩尔浓度，单位为摩尔每升（ mol/L ）;V――试样测定所消耗的标准滴定溶液的体积，单位为毫升（ mL）;V0 相应的空白测定所消耗的标准滴定溶液的体积，单位为毫升（ mL）；M 样品量，克或毫升（g或mL）A.2.7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%A.3 方法三：紫外分光光度法（本方法依据《中华人民共和国药典》 中醋酸氯己定软膏的测 定方法）A.3.1 适用范围适用于软膏型或液体制剂型含氯己定类 （包括醋酸氯己定、 葡萄糖酸氯己定、 盐酸氯己定）的单方消毒剂A.3.2 原理样品中的醋酸氯己定经氯仿溶解基质，再用 1.5 mol/L的醋酸溶液提取，在波长 260 nm处测定吸光度值定量A.3.3 仪器A.3.3.1 紫外分光光度计。

A.3.3.2 电子天平，感量为 0.1 mgA.3.4 试剂除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯 ，实验用水为GB/T 6682规定的一级水A.3.4.1 醋酸氯己定(8HoCl2Nw?2GHO, CASt： 56-95-1 )标准品氯仿（CHC3）冰醋酸（HPO4分析步骤标准溶液测定精密称取醋酸氯己定标准品约 10 mg置100 ml容量瓶中，加1.5 mol/L醋酸溶液溶解并 稀释至刻度，摇匀，精密量取 5 mL，置50 mL量瓶中，用乙醇稀释至刻度，在 260 nm的波长 处测定吸光度A.3.5.2 样品测定精密称取样品适量（约相当于醋酸氯己定 10 mg），置分液漏斗中，加微温氯仿 30 mL,振摇使基质溶解，用1.5 mol/L醋酸溶液提取5次（20 mL 20 mL 15 mL 15 mL、15 mL）， 合并酸液于100 m量瓶中，用1.5 mol/L醋酸溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取 5 mL，置50m量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，在 260 nm的波长处测定吸光度液体剂型醋酸氯己定消毒液，直接用 1.5 mol/L醋酸溶液稀释后，再用乙醇稀释，测定吸光度A.3.6 结果计算样品中醋酸氯己定含量，计算公式见式（ A.3 ）。

A2 mA, M (A.3)式中：X――样品中醋酸氯己定的含量，单位为克每千克或克每升（ g/kg或g/L）；m醋酸氯己定标准品的质量，单位为毫克（ mg）；A ――醋酸氯己定标准溶液的吸收值；A——样品溶液的吸收值；M—样品量，克或毫升（g或mL）注：葡萄糖酸氯己定含量测定可以用醋酸氯己定做标准品，并将结果乘以 1.4352盐酸氯己定含量测定可以用醋酸氯己定做标准品，并将结果乘以 0.9246A.3.7 精密度10%在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的175 mAu图A.1醋酸氯己定的高效液相色谱图mini。