关于BSA封闭液的使用方法大讨论.docx

A、请问各位高手,在进行免疫荧光的实验时, 浸一抗之前,要用的封闭液中 1%的 BSA 是怎么配制? 封闭液封闭后还用 PBS 清洗干净再浸一抗吗?1.可以直接用 0.02M 的 PBS 配制2.不用 PBS 清洗干净，直接浸一抗B、各位高手，间接法中我想摸索封闭液 BSA 的最佳浓度，用抗原 包被后，用不同浓度的BSA(0.5%，1%，2% ，3%) 封闭，其他条件固定，测得 OD450nm 后，可以看出随着 BSA 浓度增高，空白值降低，待测样品的 OD450nm 值也降低， ，应该如何确定 BSA 的最佳浓度?Q1、你的 BSA 浓度是否太高? 最常用的封闭剂是 0.05%-0.5%的 BSA，封闭是否必要，取决于 ELISA 的模式及具体的实验条件并非所有的 ELISA 固相均需封闭，封闭不当反而会使阴性本底增高一般说来，双抗体夹心法，只要酶标记物是高活性的，操作时洗涤彻底，不经封闭也可得到满意的结果特别是用单抗腹水直接包被，因其中大量非抗体蛋白在包被时同样也吸附在固相表面，业已起到了类似封闭剂的作用但在间接法测定中，封闭一般是不可少的Q2、判断封闭条件，要考虑在此条件下是否能达到试验要求，即棋盘滴定要满足：阳性样品 OD=0.8、阴性样品 OD<=0.1，而不是看你待测样品 OD 变化趋势;过低封闭浓度势必造成本底过高，但过高又会使灵敏度降低，因此只要选择能够满足你试验要求的最低 BSA 浓度就可以了。

另外提醒，洗涤一定要彻底，很重要的Q3、包被后封闭前一般要洗涤一遍，以便于洗掉结合不牢固的包被物，防止在实验中影响实验结果;封闭后一定不要洗涤，封闭的目的就是要靠蛋白填补未被包被物占领的空间，另外封闭液一般也具有保护作用C、新生牛血清( 细胞培养时候加到 1640 的那一种)可以么，用多大的浓度配比较好啊，是用双蒸水配吗??Q1、 5%，TBS 配，BSA 是牛血清蛋白，粉剂，不是牛血清哦Q2、如果不是用 biotin-avidin 系统的话，用 5%脱脂奶粉做封闭液就可以了，廉价，效果也很好Q3、封闭液一般是用 5%的 BSA 或者是用 5%的脱脂奶粉，溶剂一般使用 TBST做实验的时候，我一直强调这样的一个原理，那就是在了解原理的基础之上，我们完全可以不拘泥于书本，进行创造就拿这个封闭液来讲，要是单纯的一种封闭效果仍然不好的话，我们完全可以两种合用，我就试过 1%的 BSA 和 5%的脱脂奶粉合用进行封闭的事例所以，搞科学研究是需要我们进行再创造的D、BSA 交联抗原注射到兔子体内得到一抗，我们 Elisa 的二抗用的是羊抗兔 HRP 标记的二抗请问，在封闭时，用什么样的封闭液比较好呢?是无蛋白封闭液，还是羊的免疫前血清?Q1、用 5%的脱脂奶粉就可以吧，溶到 PBS 里，加 0.1%的吐温-20.E、以前买的是专门的一抗稀释液，现在用完了，想换 BSA 液做封闭液用，因为牛奶太容易坏了，请问可以长期保存么么，谢谢诶，5%可以么，哈哈Q1、 5%BSA 配完放冰箱就是了，不过 BSA 还是有点贵，脱脂奶粉挺好的，现用现配就是了Q2、 BSA 确实有点贵, 我们在牛奶中加千分之 0.2 的叠氮钠, 放 4 度可保存 2 月左右Q3、 NaN3 对 HRP 是强烈抑制剂，如果你使用的是 HRP 标记~建议要么更换防腐剂，要么延长洗膜时间和次数。

其他防腐剂可以选择：硫柳汞钠、极少量的氯仿(1~2ul 就可以)Q4、 BSA 和牛奶一样，只要不臭，就可以反复使用，而且，有的高手提议放的时间长一点，效果反而更好，也许是溶解的更为彻底的缘故吧Q5、都一样吧，在不加防腐剂的情况下，两者的保存时间都不久我们实验室是牛奶+叠氮钠，虽然用的是 HRP，但只要洗膜时间有保证，一般问题不大加了防腐剂的牛奶可以用蛮长时间的，一个月应该没问题吧还有一点就是，有的蛋白用 BSA 会更好，有的蛋白则用牛奶会更好，这是我的个人经验，因为曾经用两种稀释液做过同一个样品同一个蛋白的 western，结果证实牛奶的背景更干净，特异性更好，BSA 的则会有杂带F、 请免疫荧光高手指点,我最近做了两次的免疫荧光,均失败,可基本排除是抗体问题,我想问问荧光高手,其中免疫荧光中的封闭液(我用的是 5%BSA)跟我的一抗有关吗?封闭液的选择是否和一抗的稀释液需相同,非常感谢!Q1、封闭液对一抗的结合影响不大，失败的原因不应该是封闭液的原因一抗可以用封闭液稀释我们做的经验看，相对组化中一抗的浓度，荧光的稀释比例应该大，即假如组化是 1：100 ，荧光可以试 1：50G、我的包被的蛋白是用 bsa 偶联的二十四个多肽，我想问下我用什么做封闭液才行呢?Q1、 BSA 或是酪蛋白的封闭液都行，封闭是为了封闭抗原没有占据的空白点，跟你的多肽用何种蛋白偶联没有任何关系!H、小弟课题牵涉到 ELISA 检测血清中抗原，在网上看到封闭液的配方又很多种，由于经费有限，小弟想是否也可以效仿 western blot 使用脱脂奶粉作配封闭液，不知各位有没有这方面的经验，或者能介绍一下又有效又实惠的配方Q1、脱脂奶粉做封闭液是相当得可以，另外廉价的封闭液有 BSA，酪蛋白等。

都可以用来做封闭液Q2、放在瓶子里溶解，称量好干粉和其他的盐后，放到瓶子里使劲摇……让蛋白和盐结晶充分混合，再加水很快就溶了。