MS培养基配方.docx

MS培养基母液的配制：20 >MS 大量元素(1 L): 38 g KN0 3, 33 g NH4NO3, 8.8 g CaCl 2 2H2O, 7.4 g MgS0 4 7H2O , 3.4 g KH2PO4200 >MS 微量元素(1 L): 0.166 g KI , 1.24 g H3BO3, 4.46 g MnSO 4 4H2O , 1.72 g ZnSO 4 7H20, 0.05 g Na 2MOO4 2H20, 0.005 g CuSO 4 5H20, 0.005 g C0CI2 6H2O200 HMS维生素和氨基酸(1 L) : 20 g肌醇，0.1 g烟酸，0.1 g盐酸吡哆醇 (VB6) , 0.02 g 盐酸硫胺素(thiamine hydrochloride, VB1) , 0.4 g 甘氨酸200 >MS 铁盐(1 L) : 5.56 g FeSO 4 - 7H2O , 7.46 g Na 2EDTA -2H2O,先溶 于500 mL ddH 2O,加热，调pH至5.5，定容至1 L配制大量元素母液时，为避免产生沉淀，要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品 采用分析纯化学药品先以少量重蒸馏水充分溶解后然后混合， 混合时需注意边 搅拌边混合。

CaCl2 2H2O要在最后单独加入，在溶解 CaCl2 2H2O时，蒸馏水 需加热沸腾，除去水中的CO2，以防沉淀配制铁盐母液时，FeSO 4和Na2-EDTA应分别加热溶解后混合，并置于磁 力搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄色（约加热20-30 min），调pH值至5 .5，室温 放置冷却后，再冷藏使用上述配好的母液，按照稀释倍数，配制基础 MS培养液：1 >MIS大量元素，1 >4MS微量元素，1 WS维生素和氨基酸，1 >MIS铁盐， 蔗糖30 g/L ,定容后调节pH至5.8 ,高温高压灭菌固体培养基含植物凝胶3.5g/L或琼月旨9 g/L另 MS 基本培养基可用 Murashige and Skoog Basal Salt Mixture (Sigma-Aldrich)快速配制播种方法：将烟草种子在自然条件下进行浸种处理 （无菌水中浸泡100h ）,自然晾干后 依次用酒精（70% ）和汞（0.1% ）进行消毒处理，最后用无菌水洗涤 3-5次， 彻底清除残留于种子表面的汞将消毒后的种子在无菌条件下播于 MS固体培养 基上，放入（25 i2） C的光照培养箱中培养培养30d后取样测定。

配制培养液1.溶化琼脂 用粗天平分别称取琼脂 9 g、蒸糖30 g，放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入 蒸馏水750 mL ,用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状然后再将配 好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸馏水定容至 1 000 mL，搅拌均匀2•需要注意的是，在加热琼脂、制备培养基的过程中，操作者千万不能离开，否则沸腾的琼 脂外溢，就需要重新称量、制备此外，如果没有搪瓷量杯，可用大烧杯代替但要注意大 烧杯底的外表面不能沾水，否则加热时烧杯容易炸裂，使溶液外溢，造成烫伤3. 调pH用滴管吸取物质的量浓度为 1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培养基中， 边滴边搅拌，一直到培养基的 pH为5.84. 培养基的分装 溶化的培养基应该趁热分装分装时，先将培养基倒入烧杯中，然后将烧 杯中的培养基倒入锥形瓶 (50 mL或100 mL)中注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上锥形瓶中培养基的量约为锥形瓶容量的 1/5〜1/4每1 000 mL培养基，可分装25〜30瓶高压灭菌培养基的高压灭菌包括以下几个步骤 第一，码放锥形瓶将装有培养基的锥形瓶直立于金属小筐中， 再放入高压蒸气灭菌锅内。

如果没有金属小筐， 可以在两层锥形瓶之间放一块玻璃板隔开 第二，放置其他需要灭菌的物品将其他需要灭菌的物品也放入高压蒸气灭菌锅内，如装有蒸馏水的锥形瓶、带螺口盖的玻璃瓶、烧杯、广口瓶 (以上物品都要用牛皮纸封口)，用牛皮纸包裹的培养皿、剪刀、解剖刀、镊子、滤纸、铅笔等 第三，灭菌待需要灭菌的物品码放完毕，盖上锅盖在 98 kPa、121.3 C下，灭菌20 min灭菌后取出锥形瓶，让其中的培养基自然冷却凝固最好放置 1 d后再使用Welcome ToDownload !!!欢迎您的下载，资料仅供参考！。