大孔吸附树脂的预处理方法.doc

1大孔树脂使用方法一大孔吸附树脂的预处理：大孔树脂在试验中使用时间较长必须保证不受霉菌污染新购树脂一般用氯化钠及硫酸钠处理但树脂内部存在未聚合的单体残存的致孔剂引发剂分散剂等用前必须除掉方法：预处理的流程简述如下：以 0.5BV 的乙醇浸泡树脂 24h （1BV 为 1 个树脂床体积）用 2BV 的乙醇以 2BV/h 流速通过树脂柱，并浸泡 4-5 h 用乙醇 2 BV/h 的流速洗涤树脂至流出液的加水不呈白色混浊为止再用水以同样流速洗净用 2BV 的 5%HCL 溶液以4-6 BV/h 的流速通过树脂层并浸泡树脂 2-4h 而后用水以同样流速洗至出水 pH 中性 用 2BV 的 2%NaOH 溶液 以 4-6 BV/h 的流速通过树脂层 并浸泡树脂 2-4h 而后用水以同样流速洗至出水 pH 中性 在洁净的分离柱内，放入已去除外来杂质，体积恒定的大孔吸附树脂加入相当于树脂体积0.4-0.5 倍的乙醇（或甲醇）浸泡 24 h ，然后用树脂体积的 2-3 倍的乙醇（或甲醇）与水交替反复洗脱交替洗脱 2-3 次，至最终以水洗脱后，保持分离使用前的状态醇洗脱液加水不显混浊也可用电导率、荧光和紫外吸收等作为前处理的标准。

二大孔树脂的使用中草药有效成分在大孔树脂上的吸附 是大孔树脂与有效成分形成以范德华力和氢键为主的一分子间作用力的结果大孔树脂依据其聚合物的单体组成不同，可以分成非极性和极性两大类非极性吸附树脂适合从极性溶液中（如水溶液）中吸附非极性物质中等极性树脂可从极性溶液中吸附非极性物质，还能从非极性溶液中吸附极性物质大孔树脂的孔径和比表面积是影响大孔树脂对物质的吸附的主要因素 大孔树脂比表面积越大，单位质量大孔树脂吸附的作用面积越大，单位质量大孔树脂吸附有效成分就越大而大孔树脂的比表面积还包括内孔网的面积树脂孔径过小，有效成分分子不能进入树脂内部，只能在树脂外表面吸附，相应的比表面积就比较小因此选择的时候应该根据目标物的分子量选择合适孔径的树脂才能使吸附的有效面积增大具体地应该通过实验确定1 树脂类型的确定 吸附率和吸附量的测定：吸附率E% =C0 —Ce / C0 ×100%C0 — 吸附前溶液的浓度 mg/ml Ce — 吸附后溶液浓度 E% —吸附率吸附量Q=（ C 0 —Ce）×V/W Q—吸附量 mg/g W 干树脂重 V 溶液体积考察某种树脂是否适合于该新药首先考察该树脂的比吸附值，即树脂对所纯化分离的有效成分要有较大的吸附量。

然后，需考察树脂对所分离的有效成分有良好的分离性能 目标成分能比较集中的被洗脱出来采用的方法如下A 静态吸附 以葛根素中黄酮提取为例 将 10g 处理好的树脂加入葛根素水溶液 30ML 总黄酮浓度为 9.4mg /mL 每 5min 振摇 1 次，2h 小时后分别取各树脂的吸附溶液 1ML进行吸光度的分析，计算各种树脂对葛根素总黄酮的吸附率和吸附量B 静态解析：将静态吸附的树脂过滤抽干，加 30 ml 70%乙醇解析每 5 分钟振一次 2h 后分别取各解析液测定黄酮的浓度以计算各种树脂对黄酮的解析率 2C 动态吸附 准确称取 10ml 或 20ml 树脂在干净的 2 ×20cm 色谱柱内，加入葛根素的水溶液总黄酮的浓度为 9.4mg/ml 于柱顶，以 2BV/h 的流速进行动态吸附，收集流出液按床体积收集进行分析，测出目标物的浓度如皂甙或黄酮等，然后以洗脱液体积为横坐标，流出液中的目标物含量为纵坐标绘制动态吸附曲线，计算饱和动态吸附量并计算达到吸附饱和时，所吸附的目标物的量可以比较出何种树脂的吸附量大2 药液浓度的考查：黄酮、皂苷、生物碱等在大孔树脂上是物理吸附从物理吸附等温方程可以发现。

有效成分初始浓度增加平衡吸附量增加，吸附率降低平衡吸附实际增加进柱液浓度增加平衡吸附时间增加平吸附实际延长吸附率降低取葛根素的水溶液分别加水稀释5，10，15，20 倍后上样以 2BV/h 的流速进行吸附后先以 5BV 水洗脱再用 70%乙醇洗脱，收集洗脱液至 100ML 于 250nm 计算吸光度计算总黄酮的含量即多篇文献研究结果表示当总黄酮浓度 0.5g/mL 黄酮 的药液浓度上样即可药液稀释可以提高解析率 洗脱剂浓度 中草药有效成分从大孔树脂上洗脱，是利用有效成分在洗脱液有效成热能在洗脱液中的溶解作用大于有效成分在黄酮、皂苷、生物碱以及其他苷类物质在乙醇类溶液中溶解度较大常使用乙醇作为洗脱液乙醇溶液从两方面影响有效成分在大孔吸附树脂上的吸附将中草药有效成分 pH 值 对大孔吸附树脂提取有效成分效果的影响酸性有效成分应该在酸性条件下吸附，碱性有效成分应该在碱性条件下吸附反之在解析洗脱阶段，酸性有效成分使用户碱性洗脱液洗脱效果好碱性有效成分使用酸性洗脱液效果好温度对大孔树脂提取有效成分效果的影响由于黄酮、皂甙、生物碱等有效成分在大孔树脂是通过分子间作用力，属于物理吸附温度升高，一方面有效吸附作用降低。

另一方面，有效成分在溶液中的溶解度增大综合结果温度升高可使有效成分在大孔树脂上的吸附速度和吸附量降低实验证明，葛根素的吸附量吸附量减少反之在解析阶段，应该升高温度在吸附目标物后可选用对目标物溶解度较高的溶剂如乙醇作为解析剂，采用不同浓度的乙醇作为解析剂分析洗脱液中目标物浓度求得最佳的浓度流速对吸附的影响：将浓度为 7.96 mg/ml 皂甙溶液通过玻璃柱内考察不同流速对吸附量的影响流速过大会使树脂的工作吸附量下降提早泄漏且树脂压力增大能量损失皂甙吸附以 3BV /h 为宜黄酮吸附以 三 树脂的再生及保存方法大孔树脂的再生 与保存树脂经反复使用后层析柱颜色变深柱效降低需再生处理后才能继续使用经甲醇丙酮或以稀酸和稀碱及水反复处理后即可恢复树脂的吸附能力 注意由于丙酮和氢氧化钠和丙酮有反应这两者不能同时用或程序选用保存方法 再生后的大孔树脂可用一定浓度的醇浸泡以备下次使用。