白细胞、血小板显微镜计数法.doc

白细胞显微镜计数法一） 原理取稀释酸溶液， 将血液稀释一定倍数并破坏红细胞， 滴入计数池， 计数一定范 围内白细胞数，然后换算成每升血中白细胞数二） 试剂白细胞稀释液：冰乙酸 1.0ml，加蒸馏水至100ml，再加10g/l亚甲蓝（或结晶紫）1 滴，可使白细胞略着色，用时便于区别红细胞稀释液三） 器材1. 显微镜：普通生物显微镜2. 微量吸管：吸管上刻有 10 和 20ul 两个刻度（误差 <+-1% ）微量吸管由于生产厂家 不同，质量也不相同，但不论哪家产品，在使用前均需经严格校正，且应做到每位患者 1 支3. 细胞计数板：计数板是用优质厚玻璃制成，每块计数板又分两个计数池在计数池两侧各有一条支柱，与计数池高度差是 0.1mm所以将一块平整的血细胞计数盖片放在两条支柱上时，盖片底面与计数池之距离为 0.1mm目前国内通用的是改良 Neubauer 计数板这类计数板中，每个计数池的边线长宽各为3mm，并被精密地刻划成 9个大方格，每个大方格长宽各为 1.0mm，其面积为1m m2加盖玻片后的容积为 1m m2x 0.1mm.其中四角上的大方格用单线划成 16 个中方格， 作白细胞计数用； 中央 1 大方格则用双线划成 25 个小中方格， 每 个小中方格又用单线划成 16个小格，总计为 400个小格。

大方格每边长的误差是 +-1%；盖片与计数池面之距离误差为 +-2%4. 白细胞盖片：这是特制的血细胞计数用盖片，要求表面光滑平整，两面平整度为0.002mm以内，有一定重量，不被血细胞悬液浮起其厚度应为 0.4— 0.7mm，通常大小为24 X 20 x 0.6mm盖片是否平整，可用光波干涉现象进行鉴定其方法是：将盖片擦净后，平整放在 标准平面平晶上，用日光灯照射，观察在平面平晶上所见到的干涉条纹，判断其是 否合格盖片在使用前应当用干净、柔软的吸水纤维制品拭净，特别注意勿让手接 触使其污染，否则充液时易产生气泡四） 操作1. 取小试管（12X 75mm） —支，加白细胞稀释液 0.38ml2. 采指血20ul，吸入稀释液中，混匀3. 用小滴管或点眼棒取少量混悬液，滴入计数池中，静止 2—3min.4. 用低倍镜计数四角大方格的白细胞计数时应按一定顺序，对压线的白细胞应按数 上不数下，数左不数右的原则计数五） 计算白细胞/L=四大方格白细胞数（N） /4X 10X 10 6 X 20=NX5/100X10 9=N/20X10 9/L式中： 1/4 标示平均一大方格中白细胞数X 10表示10大方格内白细胞数。

X10 6表示 1 升稀释液中白细胞数X 20 为稀释倍数血小板显微镜计数二）1.原理 利用能保护血小板的稀释液， 将血液稀释一定倍数， 滴入计数池， 计数一定范围 内血小板数，即可换算成每升血中血小板数稀释液 草酸铵稀释液 草酸铵 EDTA-Na2 蒸馏水 配好后用数层滤纸过滤， 但只加草酸铵，不加 许汝和式稀释液 尿素（ AR 或 GR ） 柠檬酸钠 甲醛溶液 蒸馏水 混合后过滤即可备用 此稀释液破坏红细胞完全， 和保存过久而失效一般只能使用 一次配量不宜过多 归纳血小板稀释液的成分包括抗凝剂，如柠檬酸盐、 甲醛等；溶血剂，如尿素、草酸铵等，以及等渗剂等2.1.0g0.012g 加至 100.0ml 清亮后使用 此液对红细胞破坏力较强， 血小板形态清楚EDTA 盐，则易产生草酸钙结晶10.0g0.5g0.1ml 加至 100.0ml视野清晰，血小板清楚但尿素易分解，可因室温升高10d， 4 摄氏度冰箱中保存，可稍延长使用期EDTA 盐等；固定防腐剂，如一种好的稀释液应具备： （1）能有效地防止血液凝固； （ 2）迅速固定血小板，防止 其聚集和形态改变； （ 3）要求红细胞破坏完全； （ 4）组成简单，易保存，不生长细菌。

三） 操作1. 取稀释液 0.38ml ，采末梢血 20ul 加入稀释液中，混匀，静置 10min 左右2. 混匀后取出少许滴入计数池，在温室中静置 10— 15min 3. 在显微镜下（低倍或高倍）计数中央大方格中 5 个小中方格（与红细胞同）的血小 板数四）5小中方格血小板数（N ）X 5X 10X 20X 10 6=N X 10 9/L五） 注意事项1. 如血小板数过低，可计数 25个中方格中的血小板数，结果X 200.2. 凡影响红白细胞计数的技术因素都应注意3. 全部器材和稀释液应十分清洁因为血小板形态不规则且细小，任何灰尘斑点都可 给计数造成困难，甚至误认4. 刺入皮肤深度要适当（ 2—3mm） ,血液应自然流出，避免挤压动作要快，以防止 血小板聚集5. 如和血常规一起做，应先采血小板计数用血6. 因血小板易聚集，所以滴入计数池之前应充分混匀，但又不能用力过度，以防止破 坏血小板7. 血小板在计数池中，完全下沉后方可计数沉积时间短，结果偏低但过长，计数 池中稀释液容易蒸发，尤其是夏季所以最好将计数板放入温室中8. 用尿素稀释液，一般应在 1h 内计数完毕，放置时间过长，计数结果偏低 .. （六） 质量控制血小板计数质控较难，但应按操作规程，并认真参照注意事项，减少血小板聚集，破 坏，排除干扰，切实辨认血小板形态，减少误认。

此外，还可根据经验进行质控，即在血片 上观察血小板与红细胞密度比例，估计血小板数量根据陈缃介绍：梅 10 个油镜视野血小 板之和乘以 2000 ，约为每微升血中血小板数。