实验六细菌荚膜染色法.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验六、细菌的荚膜染色法,实验的目的要求,学习并掌握荚膜染色法,荚膜染色的基本原理,荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶质状物质，含水量高，其成分为多糖、糖蛋白或多肽由于荚膜与染料的亲和力弱、不易着色，而且可溶于水，易在用水冲洗时被洗去所以通常用,衬托法染色,(,负染色法,),使菌体和背景着色，而荚膜不着色，在菌体周围形成一透明圈也可采用,Anthony,氏染色法,，用结晶紫使细胞和荚膜都着色，再用硫酸铜水溶液洗荚膜被脱色，但硫酸铜吸附在荚膜上呈现淡蓝色，与深紫色的菌体区分实验材料,菌种,褐球固氮菌、胶质芽孢杆菌,试剂,绘图墨水,1%,甲基紫水溶液,6%,葡萄糖水溶液,20%,硫酸铜水溶液,甲醇,香柏油,二甲苯,仪器和用具,载玻片,盖玻片,滤纸,显微镜,镜头纸,方法,湿,墨水法,干,墨水法,(P78),Anthony,氏法,(P79),湿墨水法,制备细菌墨水混合液,加盖玻片,镜检,制备细菌墨水混合液,1、滴绘图墨水,2、制备混合液,绘图墨水,滴1滴绘图墨水在载玻,片中央,挑取少量菌苔,与墨水混,合均匀涂布,加盖玻片,在盖玻片上放一张滤纸，轻轻按压吸干多余混合液,1、加盖玻片,将盖玻片一端浸泡在细菌墨水混合液中缓缓盖上盖玻片,2、吸去多余液体,勿留气泡,镜检,1、镜检,用低倍镜高倍镜观察,制片置显微镜载物台上,2、结果：,背景灰色，菌体较暗，菌体周围荚膜呈现明亮透明圈。

干墨水法,制备细菌墨水混合液,涂片,固定,染色,镜检,制备细菌墨水混合液,1、滴生理盐水,2、涂片,6%葡萄糖,在载玻片一,端,滴一滴6%,葡萄糖水,挑取少量菌苔,再加一环墨水,混合均匀,涂片,1、先将推片一,端放在混合液上,2、将推片向另,一端平行滑动,3、使混合液,均匀铺成薄层,4、干燥,室温自然晾干,固定、干燥,甲醇固定，自然干燥,甲醇,滴甲醇浸没涂片1分钟,倾去甲醇，室温自然干燥,注意：,固定及干燥均不能加热和用热风吹干，因为荚膜含水量高，加热会使其失水变形同时，菌体失水收缩，会与周围染料脱离产生透明区，导致不产荚膜的细菌被误认为有荚膜染色,1、滴甲基紫染液,2、水洗,不要直接冲菌膜,甲基紫染液,甲基紫染液染色1-2分钟,3、自然干燥,镜检,1、镜检,用低倍镜高倍镜观察,制片置显微镜载物台上,2、结果：,背景灰色，菌体紫色，菌体周围荚膜呈现明亮透明圈Anthony氏法,制,片,固定,染色,镜检,制片、固定,生理盐水,1、滴生理盐水,挑取少量菌苔,与生理盐水混匀,均匀涂布,2、涂片,滴半滴生理,盐水在载玻,片中央,3、干燥固定,室温自然晾干,染色,1%结晶紫染液,1、滴孔结晶紫染液,滴结晶紫染,色2分钟,3、脱色,20%CuSO,4,水溶液,镜检,1、镜检,用低倍镜高倍镜观察,制片置显微镜载物台上,2、结果：,背景灰色，菌体深紫色，菌体周围荚膜淡紫色。