正交试验法优选姜厚朴炮制工艺临床医学论文.doc

正交试验法优选姜厚朴炮制工艺_临床医学论文 作者：欧阳荣，周新蓓，胡铁骊，刘绍贵，张志国，邓桂明【摘要】 目的 为规范姜厚朴的炮制工艺提供技术参数方法 采用正交设计试验优选炮制工艺，以厚朴酚与和厚朴酚总含量为指标，考察烘烤温度、烘烤时间、生姜用量3种因素对炮制结果的影响结果 正交试验法取[L9（34）]为姜厚朴最佳炮制工艺，烘烤温度、烘烤时间、生姜用量对试验结果有显著影响姜厚朴的最佳工艺为：生姜用量5%，70 ℃烘8 h结论 本试验对规范姜厚朴炮制工艺具有一定的指导意义 【关键词】 姜制；厚朴酚；和厚朴酚；厚朴；正交试验〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ To optimize and establish stir-baking magnoliae cortex with ginger juice by orthogonal test [L9（34）] and provide technical index on standardization for preparation of magnoliae cortex. Methods The orthogonal test was employed to determine the three factors including baking temperature, baking time and using quantity of ginger juice concentration with the index of magnolol and honoliol. Results The baking temperature, baking time and zingiberis recens concentration were notably effected on experimental results. The best technology were 10% zingiberis recens, baking for 8 hours under 70 ℃. Conclusion The research result can be a standardization of preparing magnoliae cortex with ginger juice.〔Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ〕 magnoliae cortex; orthogonal test; stir-bake with ginger juice; magnolol; honoliol厚朴为常用中药之一，来源于木兰科植物厚朴Magnolia officinalis Rehd. et Wils.或凹叶厚朴Magnolia officinalis Rehd. et Wils. var. biloba Rehd. et Wils. 的干燥干皮、根皮及枝皮[1]。

历代炮制方法有10余种[2]，姜制为常用炮制方法，但工艺尚不统一，导致质量差异较大[3，4]本研究依据《 中国 药典》2005版部的规定，对姜制厚朴的最佳工艺条件进行了初步探讨，利用L9（3）4正交设计试验，选择烘烤温度、烘烤时间、生姜用量3个因素，以厚朴酚与和厚朴酚含量为质控指标，对厚朴姜制工艺进行了比较，现将实验结果报告如下1 实验材料 1.1 仪器高效液相色谱仪：Agilent 1100系列四元梯度泵，Agilent 1100手动进样器、 Agilent 1100 系列二级管阵列检测器、Agilent 1100工作站（Agilent公司）；岛津UV-2501PC型可见-紫外分光光度计（岛津公司）；万分之一分析天平（沈阳龙腾 电子 称量仪器有限公司）1.2 药品与试剂厚朴酚（中国生物药品检定所，供含量测定用，729-200107）；和厚朴酚（中国生物药品检定所，供含量测定用，730-9204）；甲醇（色谱纯，上海陆都化学试剂厂，20041028），其他所用试剂均为分析纯厚朴药材2005年3月从湖南省药材公司购入，经湖南中医药大学第一附属 医院 药检室周新蓓副主任药师鉴定为木兰科植物厚朴Magnolia officinalis Rehd. et Wils.的干燥干皮。

生姜市售2 方法与结果 2.1 厚朴酚与和厚朴酚的含量测定2.1.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil ODS C18(4.6 mm×100 mm 5 μm); 流动相: 甲醇-水（70∶30）, 检测波长∶294 nm；柱温∶30 ℃；流速∶1.0 mL/min；理论塔板数以厚朴酚峰计不低于3 8002.1.2 对照品溶液的制备 精密称取厚朴酚、和厚朴酚对照品适量，加甲醇制成每1 mL含厚朴酚0.0534 mg、和厚朴酚0.18 mg的混合溶液，即得2.1.3 供试品溶液的制备 取供试品粉末（过3号筛）约0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，摇匀,密塞，超声提取30 min，滤过即得2.1.4 线性关系的考察 精密吸取上述对照品溶液1、2、3、4、5 mL置5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀精密吸取上述稀释液5 μL，按上述色谱条件测定峰面积，以对照品峰面积为纵坐标，以对照品的量为横坐标进行线性回归，结果表明厚朴酚的回归方程为:Y=1 187.694 5X+19.174 0，r=0.999 7和厚朴酚的回归方程为:Y=1 278.285 8X+ 38.772 9，r=0.999 7。

色谱图见图12.1.5 精密度实验 取同一浓度的厚朴酚对照品与和厚朴酚对照品溶液，在上述色谱条件下测定，重复进样5次，测定结果厚朴酚RSD为1.04%（n=5）、和厚朴酚RSD为1.78%结果表明进样精密度良好2.1.6 稳定性实验 取供试品溶液，分别于配制后0、1、2、4、8、24 h依法测定，结果厚朴酚RSD为0.31%、和厚朴酚RSD为0.33%2.1.7 重复性实验 取厚朴炮制品的样品5份，分别按上述方法制得供试液，测定厚朴酚与和厚朴酚之和的平均含量为2.50(g，%)，RSD为2.41%（n=5）结果表明样品测定重复性良好2.1.8 加样回收实验 取已知含量的供试品（厚朴酚含量为1.41%、和厚朴酚含量为1.09%）约0.1 g，精密称定，各精密加入一定浓度的对照品溶液（取厚朴酚14.72 mg、和厚朴酚10.02 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至10 mL,摇匀，即得）1 mL，按2.1.3项下操作，分别制得供试液，以上述色谱条件测定厚朴酚、和厚朴酚含量，厚朴酚平均回收率为99.31%，RSD为0.88%；和厚朴酚平均回收率为98.55%，RSD为0.84%见表1、表2）。

2.1.9 供试品测定 取生品和各炮制品，按2.1.3项下操作，分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各5 μL，注入液相色谱仪测定，即得2.2 厚朴姜炙法工艺优选2.2.1 姜厚朴的炮制 取厚朴，刮去粗皮，洗净，润透，切丝，晒干取厚朴丝，按量加入姜汁（先将生姜洗净，捣烂，加水适量，压榨取汁，姜渣再加水适量重复压榨一次，合并汁液100 g生姜制成350 mL生姜汁充分拌匀，闷润1 h，置控温烘箱中烘干，备用2.2.2 正交试验及方差分析 ①影响炮制主要因素的确定：以烘干温度、烘干时间、生姜用量为考察因素，每个因素拟定3个水平②正交试验安排及结果 选用L9（34）正交表安排试验，炮制方法根据大生产时的实际情况操作，取表4中9个实验号的各炮制品0.2 g，精密称定，按2.1.9项下测定含量结果见表4方差分析结果见表5研究结果表明，A因素烘干温度、B因素烘干时间对试验结果有非常显著影响，C因素生姜用量有显著影响，综合考虑姜炙后便于饮片干燥及成品水分含量等因素，姜厚朴的最佳工艺组合确定为A2B2C1，即70 ℃烘4 h生姜用量5%2.3 正交试验优选工艺与《药典》法的比较按正交试验优选最佳工艺和《药典》法[取厚朴丝，加姜汁拌匀，置锅内，用文火炒干（每药材100 g，用生姜10 g）]进行炮制，取各炮制品0.2 g，精密称定，按“2.1.9”项下测定含量。

结果表明，用正交试验优选最佳工艺炮制的姜厚朴中厚朴酚与和厚朴酚的含量均高于《药典》法，见表63 讨论 厚朴药材经炮制后，厚朴酚与和厚朴酚总量明显提高，可能与改变了厚朴的物理构造，增加了厚朴酚与和厚朴酚的溶出度有关；至于所含成分之间是否有转化，有待进一步考察厚朴姜制过程中，烘干温度及时间为主要因素，温度过高或时间过长可能导致部分厚朴酚与和厚朴酚的损失，而药典法炒干温度不确切，实际操作中火候难以控制，从而影响厚朴酚与和厚朴酚的含量在本试验中，运用正交表，选出具有代表性的进行试验，以求得最优的工艺由于正交表“均衡搭配”的特点，不仅减少了试验次数，分析后结果也更加 科学 可靠我们以最佳工艺A2B2C1炮制了多批厚朴进行验证试验，结果表明此工艺是合理的 参考 文献 】 [1] 中华人民共和国卫生部药典委员会,中华人民共和国药典,一部[S]. 北京：化学 工业 出版社，2005：204.[2] 王孝涛.历代中药炮制法汇典[M]. 南昌：江西科学技术出版社,1998：239.[3] 郭丽冰,赵丽华.HPLC测定不同来源姜制厚朴中厚朴酚及和厚朴酚的含量[J]. 中国 现代 中药，2006，8（9）：17-19.[4] 李水福,潘 莉,吴俊娇.市场厚朴的质量急待重视[J]. 现代中药研究与实践,2006，20（6）：24-27.[5] 刘晓鹏,姜 宁,周大寨，等,超声法提取厚朴中厚朴酚及和厚朴酚的研究[J].中药材,2007,30（2）：237-239.。