高效液相色谱岛津LC10A基础知识PPT课件.ppt

第一节第一节 岛津岛津LC-10AT型型HPLC操作规程操作规程2021/6/71 目的目的:规范岛津规范岛津LC-10AT型高效液相色谱仪的使用型高效液相色谱仪的使用范围范围:适用于岛津适用于岛津LC-10AT型高效液相色谱仪的使用型高效液相色谱仪的使用职责职责:质检员对本规程的实施负责质检员对本规程的实施负责2021/6/72一、一、 系统组成系统组成 本系统由本系统由2个个LC-10ATvp溶剂溶剂输送泵输送泵（分主（分主/A泵和副泵和副/B泵）、泵）、Rheodyne 7725i手动手动进样阀进样阀、、SPD-10Avp紫外紫外-可见可见检测器检测器、、N2000色谱数据色谱数据工工作站作站和和电脑电脑等组成，另外还包括打印机、不间断等组成，另外还包括打印机、不间断电源等辅助设备电源等辅助设备2021/6/73 二、二、 准备准备1 、准备所需的流动相，用合适的、准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜滤膜过滤，超声脱气过滤，超声脱气20min2 、根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定、根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。

量环3、、 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的的0.45μm滤膜过滤注意腐蚀性与有机系的的溶剂）滤膜过滤注意腐蚀性与有机系的的溶剂）4 、检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正、检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常2021/6/74 接通电源，依次开启不间断接通电源，依次开启不间断电源电源、、B泵泵、、A 泵泵、、检检测器测器，待泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显，待泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱示器、主机，最后打开色谱工作站工作站三、三、 开机开机2021/6/75四、四、 参数设定参数设定1、、 波长设定波长设定：：在检测器显示初始屏幕时，按在检测器显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所键，用数字键输入所需波长值，按需波长值，按[Enter]键确认按键确认按[CE]键退出到初始屏幕键退出到初始屏幕2 、流速设定：、流速设定：在在A泵显示初始屏幕时，按泵显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需键，用数字键输入所需的流速（柱时流速一般不超过的流速（柱时流速一般不超过1ml/min），按），按[Enter]键确认。

按键确认按[CE]键退出3 、流动相比例设定：、流动相比例设定：在在A泵显示初始屏幕时，按泵显示初始屏幕时，按[conc]键，用数字键输键，用数字键输入流动相入流动相B的浓度百分数，按的浓度百分数，按[Enter]键确认按键确认按[CE]键退出2021/6/76四、四、 参数设定参数设定4、、 梯度设定：梯度设定：4.1 ：：在在A泵显示初始屏幕时，按泵显示初始屏幕时，按[edit]键，键，[Enter]键；键；4.2 ：：用数字键输入时间，按用数字键输入时间，按[Enter]键，重复按键，重复按[func]键选择所需功能键选择所需功能（（FLOW设定流速，设定流速，BCNC设定流动相设定流动相B的浓度），按的浓度），按[Enter]键，用数键，用数字键输入设定值，按字键输入设定值，按[Enter]键；键；4.3：： 重复上一步设定其它时间步骤；重复上一步设定其它时间步骤；4.4 ：：用数字键输入停止时间，重复按用数字键输入停止时间，重复按[func]键直至屏幕显示键直至屏幕显示STOP，按，按[Enter]键按[CE]键退出2021/6/77五、五、 更换流动相并排气泡更换流动相并排气泡1：： 将将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；2 ：：逆时针转动逆时针转动A/B泵的排液阀泵的排液阀180°，打开排液阀；，打开排液阀；3 ：：按按A/B泵的泵的[purge]键，键，pump指示灯亮，泵大约以指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止；（可设定）后自动停止；4 ：：将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。

将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀5 ：：如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽6 ：：如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为设流速为5ml/min，按，按[pump]键，冲洗键，冲洗3min后再按后再按[pump]键停泵，重新键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值接上柱并将流速重设为规定值2021/6/78六、六、 平衡系统平衡系统1、查看基线：、查看基线：1.1：：按《按《N2000色谱数据工作站操作规程》打开色谱数据工作站操作规程》打开“色谱工作站色谱工作站”软件，软件，1.2：：输入实验信息并设定各项方法参数后，输入实验信息并设定各项方法参数后，1.3：：按下按下“数据收集数据收集”页的页的 [ ] 按钮 2021/6/79六、六、 平衡系统平衡系统2 、等度洗脱方式、等度洗脱方式 2.1 ：：按按A泵的泵的[pump]键，键，A、、B泵将同时启动，泵将同时启动，pump指示灯亮用检指示灯亮用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积倍柱体积的流动相。

的流动相 2.2 ：：检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除 2.3 ：：观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过不超过1MPa如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按检查管路后再操作则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按检查管路后再操作 2.4 ：：观察基线变化如果冲洗至基线漂移观察基线变化如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声为，噪声为<0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样2021/6/710六、六、 平衡系统平衡系统3 、梯度洗脱方式、梯度洗脱方式3.1：： 以检验方法规定的梯度初始条件，按以检验方法规定的梯度初始条件，按2项下方法平衡系统项下方法平衡系统3.2 ：：在进样前运行在进样前运行1~2次空白梯度方法：按次空白梯度方法：按A泵的泵的[run]键，键，prog.run指指示灯亮，梯度程序运行；程序停止时，示灯亮，梯度程序运行；程序停止时，prog.run指示灯灭指示灯灭2021/6/711七、七、 进样进样1 、进样前按检测器、进样前按检测器[zero]键调零，按软件中键调零，按软件中 [零点校正零点校正] 按钮校正基线零点，再按一下按钮校正基线零点，再按一下 [查看基线查看基线] 按钮使其弹按钮使其弹起。

起2 、用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量即可、用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量即可以进样了以进样了3、含量测定的对照溶液和样品供试溶液每份至少注样、含量测定的对照溶液和样品供试溶液每份至少注样2次次 2021/6/712八、八、 谱图的判断谱图的判断 及结果计算及结果计算系统适用性实验：三个重要指标系统适用性实验：三个重要指标 ①①分离度（加强）分离度（加强）：一般应：一般应≥1.5 ②②重复性：重复性：两次谱图的峰面积应相差不的过两次谱图的峰面积应相差不的过1% ③③理论塔板数理论塔板数：应：应≥规定的理论塔板数目规定的理论塔板数目 ④④拖尾因子：拖尾因子：0.95＜＜T＜＜1.05 ⑤⑤保留时间：保留时间：对照与样品的主成分保留时间应大致一致对照与样品的主成分保留时间应大致一致 ⑥⑥RSD：： ＜＜3% 2021/6/713八、八、 谱图的判断谱图的判断 及结果计算及结果计算 1、、内内标标法法 用用含含对对照照品品和和内内标标物物质质的的对对照照溶溶液液所所得得色色谱谱峰峰响响应应值值，，按下式算出校正因子（按下式算出校正因子（f）：）： 其其中中 As和和Ar分分别别为为内内标标物物质质和和对对照照品品的的峰峰面面积积或或峰峰高高，，ms和和mr分别为加入内标物质和对照品的量。

分别为加入内标物质和对照品的量2021/6/714八、八、 谱图的判断谱图的判断 及结果计算及结果计算 2、外标法外标法：： ①①用用含含对对照照品品的的对对照照溶溶液液所所得得色色谱谱峰峰响响应应值值，，按按下下式式计计算算比比值值（（r））：：r=mr/Ar（（其其中中 mr和和Ar分分别别为为对对照照品品的的量量和和相相应应的的峰峰面面积积或或峰峰高高 ））②②再再根根据据供供试试品品溶溶液液的的色色谱谱峰峰响响应应值值，，计计算算供供试试品品中中被被测测成成分分的的含含量量（（mi））：：mi=r×Ai（（其其中中 Ai为为供供试试品品溶溶液液中中被被测测成成分分的的峰峰面面积积或峰高）或峰高）③③必必要要时时，，再再根根据据稀稀释释倍倍数数、、取取样样量量和和标标示示量量折折算算成成标标示示量量的的百百分分含量，或根据稀释倍数、取样量折算成百分含量含量，或根据稀释倍数、取样量折算成百分含量2021/6/715 九、九、 清洗管路及进样口清洗管路及进样口1、分析完毕后，先关检测器和数据处理机，再用经滤过、分析完毕后，先关检测器和数据处理机，再用经滤过和脱气的适当溶剂清洗色谱系统，正相柱一般用正已和脱气的适当溶剂清洗色谱系统，正相柱一般用正已烷，反相柱如使用过含盐流动相，则先用水，然后用烷，反相柱如使用过含盐流动相，则先用水，然后用甲醇甲醇-水冲洗，冲洗前先按（水冲洗，冲洗前先按（4.1.1~4.1.2）操作，再用）操作，再用分析流速冲洗，各种冲洗剂一般冲洗分析流速冲洗，各种冲洗剂一般冲洗15~30分钟，特殊分钟，特殊情况应延长冲洗时间。

情况应延长冲洗时间2021/6/716 九、九、 清洗管路及进样口清洗管路及进样口2、、 冲冲洗洗完完毕毕后后，，逐逐步步降降低低流流速速至至0，，关关泵泵，，进进样样器器也也应应用用相应溶剂冲洗，可使用进样阀所附专用冲洗接头相应溶剂冲洗，可使用进样阀所附专用冲洗接头3 、、关关断断电电源源，，作作好好使使用用登登记记，，内内容容包包括括日日期期、、检检品品、、色色谱谱柱、流动相、柱压，使用小时数，仪器完好状态等柱、流动相、柱压，使用小时数，仪器完好状态等2021/6/717【特殊情况】：谱流路系统，从泵、进样器、色谱柱、【特殊情况】：谱流路系统，从泵、进样器、色谱柱、到检测器通池，在分析完毕后，均应按（到检测器通池，在分析完毕后，均应按（5.1）充分冲）充分冲洗，特别是用过含盐流动相的，更应注意先用水，再洗，特别是用过含盐流动相的，更应注意先用水，再用甲醇用甲醇-水，充分冲洗水，充分冲洗 九、九、 清洗管路及进样口清洗管路及进样口2021/6/718谢谢大家！谢谢大家！2021/6/719第二节第二节 岛津岛津LC-10AT型型HPLC注意事项注意事项2021/6/720一、一、 流动相流动相1、、流流动动相相应应选选用用色色谱谱纯纯试试剂剂、、高高纯纯水水或或双双蒸蒸水水，，酸酸碱碱液液及及缓缓冲冲液液需需经经过过滤滤后后使使用用，，过过滤滤时时注注意意区区分分水水系系膜膜和和油油系系膜的使用范围；膜的使用范围； 2、、水水相相流流动动相相需需经经常常更更换换（（一一般般不不超超过过2天天）），，防防止止长长菌菌变质；变质； 3、、使使用用双双泵泵时时，，A、、B、、C、、D四四相相中中，，若若所所用用流流动动相相中中有有含含盐盐流流动动相相，，则则A、、D（（进进液液口口位位于于混混合合器器下下方方））放放置置含含盐盐流流动动相相，，B、、C（（进进液液口口位位于于混混合合器器上上方方））放放置置不不含含盐盐流动相；流动相； A、、B、、C、、D四四个个储储液液器器中中其其中中一一个个为为棕棕色色瓶瓶，，用用于于存存放水相流动相。

放水相流动相2021/6/721 二、样品二、样品1、、采采用用过过滤滤或或离离心心方方法法处处理理样样品品，，确确保保样样品品中中不不含含固固体体颗粒；颗粒； 2、、用用流流动动相相或或比比流流动动相相弱弱（（若若为为反反相相柱柱，，则则极极性性比比流流动动相相大大；；若若为为正正相相柱柱，，则则极极性性比比流流动动相相小小））的的溶溶剂剂制制备备样品溶液，尽量用流动相制备样品液；样品溶液，尽量用流动相制备样品液； 3、、手手动动进进样样时时，，进进样样量量尽尽量量小小，，使使用用定定量量管管定定量量时时，，进进样体积应为定量管的样体积应为定量管的3～～5倍；倍；2021/6/722三、色谱柱三、色谱柱1、、 使使用用前前仔仔细细阅阅读读色色谱谱柱柱附附带带的的说说明明书书，，注注意意适适用用范范围围，，如如pH值范围、流动相类型等；值范围、流动相类型等； 2、、 使用符合要求的流动相；使用符合要求的流动相； 3、、 使用保护柱；使用保护柱； 4、、 如如所所用用流流动动相相为为含含盐盐流流动动相相，，反反相相色色谱谱柱柱使使用用后后，，先先用用水水或或低低浓浓度度甲甲醇醇水水（（如如5％％甲甲醇醇水水溶溶液液）），，再再用用甲甲醇醇冲洗。

冲洗 2021/6/723三、三、 色谱柱色谱柱5、、 色色谱谱柱柱在在不不使使用用时时，，应应用用甲甲醇醇冲冲洗洗，，取取下下后后紧紧密密封封闭闭两端保存；两端保存； 6、、 不要高压冲洗柱子；不要高压冲洗柱子； 7、、 不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱；不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱； 使用过程中注意轻拿轻放使用过程中注意轻拿轻放2021/6/724四、操作过程四、操作过程1、、 开机操作：开机操作：（（1））、、打打开开电电源源，，用用Harb相相连连接接时时，，注注意意Harb电电源源，，打打开开计计算机，打开算机，打开Bootp Server（一般启动时已打开）；（一般启动时已打开）； （（ 2 ））、、自自上上而而下下打打开开个个组组件件电电源源，，Bootp Server里里显显示示有有信信号时（有六行字符），打开工作站（先打开号时（有六行字符），打开工作站（先打开On line）；）； （（3））、、打打开开冲冲洗洗泵泵头头的的10％％异异丙丙醇醇溶溶液液的的开开关关（（需需用用针针捅捅抽抽）），控制流量大小，以能流出的最小流量为准；，控制流量大小，以能流出的最小流量为准； 2021/6/725四、四、 操作过程操作过程（（ 4 ））、、注注意意各各流流动动相相所所剩剩溶溶液液的的容容积积设设定定，，若若设设定定的的容容积积低低于于最最低低限限会会自自动动停停泵泵，，注注意意洗洗泵泵溶溶液液的的体体积积，，及时加液；及时加液； （（ 5 ））、、使使用用过过程程中中要要经经常常观观察察仪仪器器工工作作状状态态，，及及时时正正确处理各种突发事件。

确处理各种突发事件 2021/6/726四、四、 操作过程操作过程2、、 先先以以所所用用流流动动相相冲冲洗洗系系统统一一定定时时间间（（如如所所用用流流动动相相为为含含盐盐流流动动相相，，必必须须先先用用水水冲冲洗洗20分分钟钟以以上上再再换换上上含含盐盐流流动动相相）），，正正式式进进样样分分析析前前30min 左左右右开开启启D灯灯或或W灯灯，，以延长灯的使用寿命；以延长灯的使用寿命； 3、、 建建立立色色谱谱操操作作方方法法，，注注意意保保存存为为自自己己命命名名的的Method，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果；，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果； 2021/6/727四、四、 操作过程操作过程4、、 使使用用手手动动进进样样器器进进样样时时，，在在进进样样前前和和进进样样后后都都需需用用洗洗针针液液洗洗净净进进样样针针筒筒，，洗洗针针液液一一般般选选择择与与样样品品液液一一致致的的溶溶剂剂，，进进样样前前必必须须用用样样品品液液清清洗洗进进样样针针筒筒3遍遍以以上上，，并并排除针筒中的气泡；排除针筒中的气泡； 5、、 溶溶剂剂瓶瓶中中的的沙沙芯芯过过滤滤头头容容易易破破碎碎，，在在更更换换流流动动相相时时注注意意保保护护，，当当发发现现过过滤滤头头变变脏脏或或长长菌菌时时，，不不可可用用超超声声洗洗涤，可用涤，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤；稀硝酸溶液浸泡后再洗涤；2021/6/728四、操作过程四、操作过程6、、 实实验验结结束束后后，，一一般般先先用用水水或或低低浓浓度度甲甲醇醇水水溶溶液液冲冲洗洗整整个个管管路路30分分钟钟以以上上，，再再用用甲甲醇醇冲冲洗洗。

冲冲洗洗过过程程中中关关闭闭D灯、灯、W灯；灯； 7、、 关关机机时时，，先先关关闭闭泵泵、、检检测测器器等等，，再再关关闭闭工工作作站站，，然然后后关关机机，，最最后后自自下下而而上上关关闭闭色色谱谱仪仪各各组组件件，，关关闭闭洗洗泵泵溶溶液的开关；液的开关； 2021/6/729四、操作过程四、操作过程8、、 使用者须认真履行仪器使用登记制度，出现问题及时使用者须认真履行仪器使用登记制度，出现问题及时向老师报告，不要擅自拆卸仪器未经操作培训，不向老师报告，不要擅自拆卸仪器未经操作培训，不得擅自使用仪器得擅自使用仪器 2021/6/730自己总结的12条注意事项 以下以下12条注意事项是自己在安装和使用液相色谱条注意事项是自己在安装和使用液相色谱仪中的经验得出的，可能存在某些片面性，如有不当仪中的经验得出的，可能存在某些片面性，如有不当之处请多提宝贵建议之处请多提宝贵建议 2021/6/7311、流动相必须用、流动相必须用HPLC级级的试剂，使用前过滤除去其中的的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质颗粒性杂质和其他物质(使用使用0.45um或更细的膜过滤或更细的膜过滤)。

2、流动相过滤后要用超声波、流动相过滤后要用超声波脱气脱气，脱气后应该恢复到室温，脱气后应该恢复到室温后使用2021/6/7323、、不不能能用用纯纯乙乙腈腈作作为为流流动动相相，，这这样样会会使使单单向向阀阀粘粘住住而而导导致致泵泵不进液 4、使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去、使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水离子水冲洗管路冲洗管路及柱子一小时，然及柱子一小时，然 后用甲醇后用甲醇(或或甲醇水溶液甲醇水溶液)冲洗冲洗40分钟以上，分钟以上，以充分洗去离子对于柱塞杆以充分洗去离子对于柱塞杆 外部，做完样品后也必须用外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗去离子水冲洗20ml以上2021/6/7335.长长时时间间不不用用仪仪器器，，应应该该将将柱柱子子取取下下用用堵堵头头封封好好保保存存，，注注意意不不能能用用纯纯水水保保存存柱柱子子，，而而应应该该用用有有机机相相(如如甲甲醇醇等等)，，因因为为纯纯水水易长霉 6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂(如甲醇如甲醇)等清洗进样等清洗进样器2021/6/7347.C18柱绝对不能进柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品蛋白样品，血样、生物样品。

8.堵塞导致压力太大，按预柱堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器混合器中的过滤器→管路过滤器管路过滤器→单向阀检查单向阀检查 并清洗 清洗方法：清洗方法：①①以异丙醇作溶剂冲洗；以异丙醇作溶剂冲洗；②②放在异丙醇中间用超声放在异丙醇中间用超声波清波清 洗；洗；③③用用10％稀硝酸清洗％稀硝酸清洗2021/6/7359.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量量避免产生气泡避免产生气泡 10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相液前要进行流动相 的清洗2021/6/73611.要注意柱子的要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品碱性样品 12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边清洗，更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边清洗，然后插入新的然后插入新的 流动相中更换无互溶性的流动相时要用异丙流动相中更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下醇过渡一下2021/6/737谢谢大家！2021/6/738第三节第三节 高效液相色谱中高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法常遇见的问题及处理方法 2021/6/739一、一、 保留时间变化保留时间变化1.柱温变化柱温变化2.等度与梯度间未能充分平衡等度与梯度间未能充分平衡3.缓冲液容量不够缓冲液容量不够4.柱污染柱污染5.柱内条件变化柱内条件变化6.柱快达到寿命柱快达到寿命1.柱恒温柱恒温2.至少用至少用10倍柱体积的流动相平衡柱倍柱体积的流动相平衡柱3.用用>25mmol/L的缓冲液的缓冲液4.每天冲洗柱每天冲洗柱5.稳定进样条件稳定进样条件,调节流动相调节流动相6.采用保护柱采用保护柱2021/6/740二、二、 保留时间缩短保留时间缩短 1.流速增加流速增加2.样品超载样品超载3.键合相流失键合相流失4.流动相组成变化流动相组成变化5.温度增加温度增加1.检查泵检查泵,重新设定流速重新设定流速2.降低样品量降低样品量3.流流 动动 相相 PH值值 保保 持持 在在3~7.5检查柱的方向检查柱的方向4.防止流动相蒸发或沉淀防止流动相蒸发或沉淀5.柱恒温柱恒温2021/6/741三、三、 保留时间延长保留时间延长 1.流速下降流速下降2.硅胶柱上活性点变化硅胶柱上活性点变化3.键合相流失键合相流失4.流动相组成变化流动相组成变化5.温度降低温度降低1.管管路路泄泄漏漏,更更换换泵泵密密封封圈圈,排除泵内气泡排除泵内气泡2.用用流流动动相相改改性性剂剂,如如加加三三乙胺乙胺,或采用碱至钝化柱或采用碱至钝化柱3.流流动动相相PH值值保保持持在在3~7.5检查柱的方向检查柱的方向4.防止流动相蒸发或沉淀防止流动相蒸发或沉淀5.柱恒温柱恒温2021/6/742四四  、、 出现肩峰或分叉出现肩峰或分叉 1.样品体积过大样品体积过大2.样品溶剂过强样品溶剂过强3.柱塌陷或形成短路通道柱塌陷或形成短路通道4.柱内烧结不锈钢失效柱内烧结不锈钢失效5.进样器损坏进样器损坏1.用用流流动动相相配配样样,总总的的样样品品体体积积小小于于第第一一峰峰的的15%2.采用较弱的样品溶剂采用较弱的样品溶剂3.更换色谱柱更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件采用较弱腐蚀性条件4.更换烧结不锈钢更换烧结不锈钢,加过滤器加过滤器,过滤样品过滤样品5.更换进样器转子更换进样器转子2021/6/743五、五、 鬼峰鬼峰 1.进样阀残余峰进样阀残余峰2.样品中未知物样品中未知物3.柱未平衡柱未平衡4.三三氟氟乙乙酸酸(TFA)氧氧化化(肽谱肽谱)5.水污染水污染(反相反相)1.每每次次用用后后用用强强溶溶剂剂清清洗洗阀阀,改改进进阀阀和和样品的清洗样品的清洗2.处理样品处理样品3.重重新新平平衡衡柱柱,用用流流动动相相作作样样品品溶溶剂剂 (尤其是离子对色谱尤其是离子对色谱)4.每天新配每天新配,用抗氧化剂用抗氧化剂5.通通过过变变化化平平衡衡时时间间检检查查水水质质量量，，用用HPLC级的水级的水2021/6/744六、六、 基线噪声基线噪声 1.气泡气泡(尖锐峰尖锐峰)2.污染污染(随机噪声随机噪声)3.检测器灯连续噪声检测器灯连续噪声4.电干扰电干扰(偶然噪声偶然噪声)5.检测器中有气泡检测器中有气泡1.流动相脱气流动相脱气,加柱后背压加柱后背压2.清清洗洗柱柱,净净化化样样品品,用用HPLC级试剂级试剂3.更换氘灯更换氘灯4.采采用用稳稳压压电电源源,检检查查干干扰扰的的来源来源(如水浴等如水浴等)5.流动相脱气流动相脱气,加柱后背压加柱后背压2021/6/745七、七、 峰拖尾峰拖尾 1.柱超载柱超载2.峰干扰峰干扰3.硅羟基作用硅羟基作用4.柱内烧结不锈钢失效柱内烧结不锈钢失效5.柱塌陷或形成短路通道柱塌陷或形成短路通道6.死体积或柱外体积过大死体积或柱外体积过大7.柱效下降柱效下降1.降低样品量降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相增加柱直径采用较高容量的固定相2.清洁样品清洁样品,调整流动相调整流动相3.加加三三乙乙胺胺,用用碱碱致致钝钝化化柱柱增增加加缓缓冲冲液液或或盐盐的的浓浓度度降降低低流动相流动相PH值值,钝化样品钝化样品4.更换烧结不锈钢更换烧结不锈钢,加过滤器加过滤器,过滤样品过滤样品5.更换色谱柱更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件采用较弱腐蚀性条件6.连连接接点点降降至至最最低低,对对所所有有连连接接点点作作合合适适调调整整,尽尽可可能能采用细内径的连接管采用细内径的连接管7.用较低腐蚀条件用较低腐蚀条件,更换柱更换柱,采用保护柱采用保护柱2021/6/746八、峰展宽八、峰展宽 1.进样体积过大进样体积过大2.在进样阀中造成峰扩展在进样阀中造成峰扩展3.数据系统采样速率太慢数据系统采样速率太慢4.检测器时间常数过大检测器时间常数过大1. 用用流流动动相相配配样样,总总的的样样品品体体积积小小于第一峰的于第一峰的15%2.进样前后排出气泡以降低扩散进样前后排出气泡以降低扩散3.设定速率应是每峰大于设定速率应是每峰大于10点点4.设设定定时时间间常常数数为为感感兴兴趣趣第第一一峰峰半半宽的宽的10%2021/6/747八、峰展宽八、峰展宽5.流动相粘度过高流动相粘度过高6.检测池体积过大检测池体积过大7.保留时间过长保留时间过长8.柱外体积过大柱外体积过大9.样品过载样品过载5.增加柱温增加柱温,采用低粘度流动相采用低粘度流动相6.用小体积池用小体积池,卸下热交换器卸下热交换器7.等等度度洗洗脱脱时时增增加加溶溶剂剂含含量量也也可可用用梯梯度洗脱度洗脱8.将连接管径和连接管长度降至最小将连接管径和连接管长度降至最小9.进小浓度小体积样品进小浓度小体积样品2021/6/748谢 谢！2021/6/749部分资料从网络收集整理而来，供大家参考，感谢您的关注！。