Nanodrop_2000微量紫外分光光度计中文操作守则.pdf
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Nanodrop2000独特的创新设计包括：1、微量的样本检测体积-专利液体表面张力技术，仅需0.5ul的样本2、快速、简单的样本处理-大多数样本无需稀释，直接上样3、快速的检测时间-不到5秒钟即可得到完美的检测结果4、更宽广的光谱范围-190-840nm，可以测定低波长下的蛋白广吸收5、更高的样本浓度检测范围-检测上限高达15,000ng/ul(dsDNA)一、简介NanoDrop 2000 超微量分光光度计是NanoDrop 的最新产品，应用液体的表面张力特性，样品体积只需要0.5~2ul，在侦测台上，经上下臂的接触拉出固定的光径达到快速、微量、高浓度、免石英管、免毛细管等耗材侦测吸收值的优点它使用高能量氙灯(pulsed xenonflash lamp)可提供190~840nm 的全光谱侦测，且不需要暖机，开机后立即使用搭配高感度CCD array 侦测器，侦测吸收值可高达300Abs(dsDNA 浓度2~15000ng/ul)，大部分纯化后的核酸几乎都不需要稀释即可侦测待测样品的均质性是NanoDrop 2000 的最高要求，一般核酸、蛋白质样品能在侦测前以vortex mixer 震匀为最佳，若无vortex mixer 也应以pipette 吸放数次混匀。
若担心genomicDNA 可能因前述动作而断裂，则改以55 ?C 加热约一分钟，使样品在侦测前呈现均匀状态，以确保2ul 具有代表性侦测时选择不同侦测模式，可以得到最快速的结果：● Nucleic Acid – 吸收光谱、230nm, 260nm, 280nm 吸收值(换算成10mm 光径吸收值)、260/280 ratio、260/230 ratio 及核酸浓度● UV-Vis – 190~840nm 间所有波长的吸收值及光谱(以1mm 光径吸收值呈现)● A280 蛋白质定量法– 280nm 吸收值(换算成10mm 光径吸收值)、260/280 ratio 及蛋白质浓度仅适用于纯化后的蛋白质，须具有已知的质量消光系数(mass extinctioncoefficient)方可计算● BCA、Bradford 及Lowry – 依不同呈色剂提供不同波长吸收值结果，自动画出标准曲线并计算R square，待测蛋白质浓度 蛋白质侦测模式目前提供BCA、Bradford 及Lowry 三种常见定量呈色剂，因呈色剂随时间会逐渐加深，使用前请详阅试剂说明书并制备不同浓度的标准品，在最佳时间内完成侦测，以得到良好的标准曲线。
每个标准曲线最多可有七个标准品，每个标准品最多可做五重复 测蛋白质时样品体积需使用2ul，每个样品侦测后需以labwipe 擦拭15~20 回，以避免呈色剂与蛋白质的残留二、技术参数：1、波长范围: 190-840nm；2、波长精度: 1nm；3、分辨率: <1.8 nm (FWHM at Hg 253.7 nm)；4、其它: 1mm 光程长度(可自动调整到0.05mm)；5、检测下限：2ng/μl(dsDNA)；6、检测上限：15000ng/μl(dsDNA)；7、吸光率精确度：0.002 absorbance (1mm 光程)；8、吸光率准确性：2%(at 0.76 at 257 nm)；9、吸光率范围：0.02-300 (相当于10mm 光程)；10、核酸检测周期：< 5s；11、体积：14cm×20cm三、使用方法举例：dsDNA：在主画面点选Nucleic Acid，计算机与仪器自动完成联机依照DNA 所溶于之液体准备该溶液(务必确认DNA 溶于二次水、TE buffer 或哪一组kit 的elution buffer)取出1.5 ul 点在侦测台上，放下上臂后再按Blank。
在右上方拉选Sample Type 选DNA-50，在Sample ID 位置输入样品名称，将样品混匀，取出1.5 ul 点在侦测台上，放下上臂后再按Measure四、结果整理：NanoDrop2000 软件在侦测一开始会询问档案欲存至何处，若未指定，则档案会存在上一个使用者的档案内 / B O P % S P Q"Á ÖP¨ÿiY[ a©" Ö¥ (É^ / B O P % S P Q ¥KÚ1 pBîÖ aâÉ" Ö ? © -[ W P S U F Y N J Y F S ¹KD Ïí W P S U F Y N J Y F S9[ Q J Q F U U F bQ b Ï H F O P N J D % / " V ?y -îT75¿[ ﾟ $F £ÿBsÒP" Ö © -ïC ( ÿ[ V M µ}V a©ª ë'P¨Zä¼ , J N X J Q F ËZûë b5 |Bf|/ûë¥A8 < |N M B C P S B U P S Z X J Q F V" Ö¥ëQ| =|ݹQª[Z_ QZûë % / " Q 1 S P U F J O Q b a]B¯A8º ?SBQ©àׯç]B" Ö hÕ -B¯× |B¯É© b a'Ö" Ö VP¨ _ V MS©ÛòA88+]öµ]8³ pð5ÑV V M bi hP¨ V M Q J Q F U U FEç8@ÁAøíEî b·âÉ" Öyï ä4ÐâÉ'&+ AP¨ V MÉ© b a ÈqKpßH hW% iG·UÉp¸ " bKÈ?3¥ f^ ©VñAøià î ÈqöC[/ß b V5¨ ½4³Aø^à õ¤/ûë" Ö =µ |D ªÕ¾¯" Ö ×É©A1H V|"Ö8FvÀ V M b ¥Aø¹ a VP¨cµ ) Z E S P G M V P S J D " D J E ) ' " Ö ñíªKA8¥ VP¨ b。
