V-P试验及甘油品红试验.doc

V-P试验及甘油品红试验1、原理：某些细菌能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸经缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中的O2氧化为二乙酰，在α-萘酚和肌酸的催化作用下，二乙酰与培养基中的蛋白胨中精氨酸等所含的胍基生成红色化合物，即V-P试验阳性，称V－P（+）反应应用：本试验常与甲基红试验一起使用二者结果通常相反即如大肠埃氏菌、沙门菌、志贺菌等甲基红呈阳性反应，而VP反应则为阴性沙雷菌、阴沟肠杆菌等，VP反应为阳性，而甲基红反应为阴性2、试验方法（1）奥梅拉（O’Meara）法 （2）贝立脱（Barritt）氏法 （3）快速法　（１）奥梅拉法Ø 将试验菌接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基，于36±1 ℃培养48h， 每1mL培养液加奥梅拉O’Meara试剂0.1ml，摇动试管1~2min，静置于37℃恒温箱4h ，或在48~50 ℃水浴放置2h后判定结果2）贝立脱法Ø 将试验菌接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培养基，于36±1℃培养2天，每2mL培养液先加入6%a-萘酚纯酒精溶液1mL，再加40%氢氧化钾水溶液0.4ml，摇动2~5min，阳性菌常立即呈现红色，若无红色出现，静置于室温或36±1 ℃培养 4h ，如显现红色为阳性，呈黄色或有类似铜色者，可判定为阴性。

3）快速法Ø 将0.5%肌酸溶液2滴放于小试管中，挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环，乳化接种于其中，加入5%α-萘酚3滴，40%氢氧化钠水溶液2滴，振动后放置5min，判定结果不产酸的培养物不能使用3、结果观察与记录Ø （1）发酵管出现红色者，为阳性， 记V-P +Ø （2）发酵管为黄色或铜绿色者，为阴性，记 V-P -甘油品红试验1、原理：某些细菌可分解甘油成为丙酮酸，并进一步脱羧生成乙醛，乙醛与无色品红生成醌式化合物，呈深紫红色，以此鉴别细菌2、试验方法:取待检菌的新鲜纯培养物，接种于甘油品红肉汤培养基中，于36±1 ℃培养8天,并用未接种的培养基在相同条件下培养作为阴性对照，观察结果3、结果观察与记录Ø （1）出现紫色或紫红色者,为阳性，记录为+Ø （2）与对照管颜色相同者,为阴性，记录为-。