还原糖测定法.doc

3,5-二硝基水杨酸比色法1 原理3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖（各种单糖和麦芽糖）溶液共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和棕红色物的颜色深浅呈一定比例关系在 540nm 波长下测定棕红色物质的消光度值，查标准曲线，便可求出样品中还原糖的含量2 仪器与用具25ml 刻度试管；大离心管；100ml 烧杯；100ml 三角瓶；100ml 容量瓶 ；刻度吸管 1ml、2ml、10ml ；水浴锅；离心机；电子天平；分光光度计3 试剂 1mg/ml 葡萄糖标准液：准确称取 100mg 分析纯葡萄糖（预先在 80℃烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，转移到 100ml 的容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用3,5-二硝基水杨酸试剂： 6.3g 3,5-二硝基水杨酸和 262ml 2mol/L NaOH 溶液，加到 500ml 含有 185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加 5g 结晶酚和 5g 亚硫酸钠，搅拌溶解冷却后加蒸馏水定容至 1000ml，贮于棕色瓶中备用4 方法 4.1 制作葡萄糖标准曲线: 取 7 支具有 25ml 刻度试管，编号，按表 1 所示的量，精确加入浓度为 1mg/ml 的葡萄糖标准液和 3,5-二硝基水杨酸试剂。

表 1 各试管加溶液和试剂的量管号 0 1 2 3 4 5 6葡萄糖标准液(ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2蒸馏水（ml） 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.83,5-二硝基水杨酸试剂（ml） 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5相当葡萄糖量(mg) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.24．2 样品中还原糖的测定（ 1）样品中还原糖的提取： 准确称取 2.0g 豆芽样品，加入 10mL 水，磨匀，转入离心管中，置于 60℃恒温水浴中保温 20min，使还原糖浸出4000转/每分钟离心 10min，上清液作为还原糖待测液 2）显色和比色： 取 3 支 25ml 刻度试管，编号，分别加入还原糖待测液2ml，3,5-二硝基水杨酸试剂 1.5ml，其余操作均与制作标准曲线相同，测定各管的消光值分别在标准曲线上查出相应还原糖 mg 数，按下式计算还原糖百分含量：还原糖%=（还原糖毫克数 *样品稀释倍数*100）/样品重量总糖量%=( 水解后还原糖毫克数 *样品稀释倍数*100)/样品重量式中:C－标准曲线方程求得的还原糖 mg 数；V－提取液的体积（ml）；a－显色时吸取样品液体积（ ml）；W－样品重（g）。