质粒定量时各指标含义.docx

质粒定量时各指标含义1. A260nm是核酸最高吸收峰的吸收波长，最佳测量值的范围为0.1 至 1.0如果不在此范 围，稀释或浓缩样品，使之在此范围内；如果吸光度小于 0.05，检查是否存在 操作因素（如移液不准确，样品内有悬浮物等）影响DNA样品的A260吸光度 值是否＞0.1请注意，这个值跟仪器无关，核酸的吸光度必需大于0.1，其值 才有效和可靠，因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通常会对光有一定吸 收，其值＜0.1）；朗伯－比尔定律：A 吸光值I0 入射光强度I 投射光强度c吸光物质的摩尔浓度（mol/L）d光通过的液层厚度（cm）8摩尔吸光系数（Lmol-lcm-1）2. A280nm 是蛋白和酚类物质最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯 DNA的A260/A280比值为1.8，纯RNA为2.0如果比值低，表示受到蛋白（芳 香族）或酚类物质的污染，需要纯化样品比值 =1.5相当于50%蛋白质/DNA溶 液3. A230nm是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯DNA 和RNA的A260/A230比值为2.5若比值小于2.0标明样品被碳水化合物（糖类）、 盐类或有机溶剂污染，需要纯化样品。

A230产生负值主要是由于在很低DNA浓 度的溶液中的一些其他成分的干扰所导致的在下一个测定中，需要降低样品的 稀释度， A230 的负值会被校正4. A320nm 或 A340nm 为检测溶液样品的浊度和其他干扰因子该值应该接近0.0如果不是，标明溶 液中有悬浮物，需要纯化样品纯样品的A320 一般是05. A260/A280 和 A260/A230是核酸纯度的指示值，纯度好的DNA,在pH7-8.5下其比值应该在2.0或2.5, A260 / A280的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是280 nm纯 净的样品比值大于1.8 （DNA）或者2.0 （RNA）如果比值低于1.8或者2.0， 表示存在蛋白质或者酚类物质的影响A230是多肽、芳香基团、苯酚和一些碳氢化合物的吸光度，A230表示样品中存 在一些污染物，如碳水化合物、多肽、苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值 大于 2.0 A280 是蛋白质的吸光度A双波长检测:260nm—核酸280nm—蛋白A 定量:C=0D260*50*稀释倍数(U g/mL )» 纯度指标：OD26o/OD28o比值范围： 上1.8〜2. 02污染成分:蛋白，酚质粒DNARNA。