酵母RNA的分离及组分鉴定.doc

酵母核糖核酸的分离及组分鉴定一、 目的：1.掌握稀碱（NaOH）法分离酵母RNA的原理与方法2.了解RNA的组分并掌握定性鉴定的具体方法二、原理：酵母核酸中RNA含量较多RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，是用氢氧化钠使酵母细胞壁变性、裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA提取的RNA有不同程度的降解由此即得到RNA的粗制品 三、器材　　四、试剂和材料　　 将2mL 10％三氯化铁溶液（用FeCl3·6H2O配制）加入 到400 mL浓盐酸中 9．苔黑酚乙醇溶液 10 mL ：溶解6g苔黑酚于100 mL 95％乙醇中（可在冰箱中保存1个月）10．酵母粉 200 g11.地衣酚（3,5—二羟甲苯试剂）：取比重1.19HCl 100ml，加入FeCl3·6H20 100mg及二羟甲苯100mg，混匀溶解后，置于棕色瓶中，此试剂必须在临用前新鲜配制五、操作1.将15g酵母悬浮于90 mL 0.04 mol／L氢氧化钠溶液 中，并在乳钵中研磨均匀将悬浮液转移至150毫升锥形瓶 中在沸水浴上加热30分钟后，冷却离心（3000 r／min）15分钟，将上清液缓缓倾入30 mL酸性乙醇溶液中。

注意要一边搅拌一边缓缓倾入待核糖核酸沉淀完全后，离心（3000 r／min）3分钟弃去清液用95％乙醇洗涤沉淀两次，乙醚洗涤沉淀一次后，再用乙醚将沉淀转移至布氏漏斗中抽滤沉淀可在空气中干燥2.核糖的鉴定：取试管两只，分别标明测定管与对照管，然后依次加入下列各试剂管 号RNA水解液5％H2SO43，5-二羟甲苯测定管4滴不加6滴对照管不加4滴6滴将两试管放入沸水浴内加热10分钟，比较两管之颜色六． 实验结果测定管由黄色变成绿色为阳性反应，对照管没有明显颜色反应七． 注意事项1.样品倒入玻璃离心管不能太满；2.离心前玻璃离心管（套上塑料管套）放在天平上平衡好；。